Поиск анализа

№, Антитела класса IgG к Leishmania

Срок исполнения

*указанный срок не включает день взятия биоматериала

Исследуемый материал

Метод определения

            
 

ОПИСАНИЕ

Лейшманиозы – это группа инфекционных заболеваний, которые поражают диких и домашних животных повсеместно. Инфекция передается москитами из рода Phlebotomus в Старом Свете и Lutzomyia в Новом Свете.
Лейшманиозы вызываются простейшими из рода Leishmania, класса Kinetoplasta, семейства Trypanosomatidae. Род Leishmania делится на подроды Leishmania и Viannia, которые отличаются локализацией стадий развития паразита в организме москита. Лейшманиоз, вызванный Leishmania infantum, приводит к развитию наиболее тяжелой формы заболевания у собак в некоторых регионах, но реже встречается у кошек. Собаки являются основным резервуаром инфекции L. infantum (синоним Leishmania chagasi), вызывающей заболевание собак и человека. Другие виды Leishmania были выделены как возбудители инфекции собак в разных географических регионах, в том числе L. donovani, L. tropica, L. braziliensis, L. peruviana, L. panamensis и L. amazonensis.
При питании москита на зараженном животном лейшмании (находящиеся в макрофагах в виде амастигот) попадают в кишечник насекомого. Питаются кровью только самки москитов. В кишечнике членистоногих амастиготы выходят из клеток-хозяев (макрофагов), проходят ряд морфологических изменений, преобразуются в межклеточную, жгутиковую проциклическую форму – промастиготы, и интенсивно размножаются. После нескольких этапов размножения на поверхности клеток паразитов происходят генетически регулируемые молекулярные изменения, что приводит к их отрыву от эпителия средней кишки москита и последующей миграции инфекционных метациклических промастигот в переднюю кишку и ротовой аппарат переносчика. Промастиготы со слюной при повторном питании москита попадают в кожу хозяина – позвоночного.
Промастиготы в организме хозяина фагоцитируются макрофагами, в цитоплазме которых они содержатся в фаголизосомах, образуя так называемые паразитиформные вакуоли, отделяющие их от механизмов клеточной защиты организма. Внутри макрофагов промастиготы теряют жгутики, преобразуются в амастиготы и медленно размножаются. Когда макрофаги разрываются, высвобожденные амастиготы проникают в другие клетки хозяина и распространяются от места укуса. В первую очередь лейшмании имеют тропность к таким органам как лимфатические узлы, селезенка, костный мозг и печень. Их распространение ведет к развитию системной инфекции.
Интересно отметить, что распространение амастигот Leishmania в органах плода в утробе матери аналогично таковому, которое наблюдается у взрослых собак, и в основном происходит также в органах лимфоретикулярной системы.
Заболевание развивается не у всех спонтанно или экспериментально инфицированных Leishmania. Индивидуальный иммунный ответ, очевидно, являетсянаиболее важным фактором, определяющим дальнейшее развитие инфекции после инокуляции возбудителя, возможное развитие генерализованной формы, а также, будет ли иметь место прогрессирование от субклинической до клинической формы заболевания. На начальном этапе после инфицирования очевидных клинических симптомов не наблюдается, но если иммунные механизмы защиты не останавливают процесс репликации амастигот, то заболевание прогрессирует с появлением симптоматики.
У собак, иммунная система которых способна противостоять инфекции либо путем устранения патогена, либо ограничением его распространения, происходит развитие субклинической формы болезни, которая продолжается в течение длительного времени, они считаются устойчивыми к инфекции. Однако у собак с субклиническим течением заболевания различные факторы, вызывающие иммуносупрессию, могут привести к появлению клинической картины болезни. Иммунный ответ в результате инфицирования Leishmania идет как по типу активации Th1-клеточного ответа, приводящего к повышению восприимчивости и обострению болезни, так и по пути Th2-клеточного ответа, приводящего к повышению резистентности к заболеванию. Исследования показали, что у собак L. infantum, по-видимому, вызывает неоднозначную реакцию Th1/Th2- ответов в обоих случаях, как у животных с субклиническим течением заболевания, так и у больных с активной инфекцией. Макрофаги играют центральную роль в контроле над распространением инфекции Leishmania в организме. Цитокины, такие как IFN-гамма, IL-2 и фактор некроза опухолей-альфа, секретируемые активированными Т-клетками, индуцируют макрофагальную активность против лейшманий. Было установлено, что оксид азота, производимый макрофагами собак, является основной эффекторной молекулой, обеспечивающей уничтожение амостигот лейшманий.
Кроме того, L. infantum подавляют выработку IL-12, что приводит к развитию неэффективного Тх2-пути иммунной защиты с заметным IgG ответом, и что позволяет инфицированным макрофагам разносить лейшманий по всему организму. Сильная реакция гиперчувствительности замедленного типа на внутрикожный тест, свидетельствующий о клеточно-опосредованном ответе на инвазирование Leishmania, встречается у резистентных собак, которые подверглись воздействию паразита, и отсутствует у тяжелобольных собак. У большинства инфицированных собак на внутрикожное введение антигена в начале инфекции развивается специфический клеточный иммунитет, выражающийся в форме пролиферации лимфоцитов. Однако по мере прогрессирования заболевания у восприимчивых собак эти реакции уменьшаются. Кроме того, нарушается процесс внутриклеточного уничтожения паразита нейтрофилами и моноцитами. В период заболевания изменения происходят в популяции лимфоцитов и других лейкоцитов. Исследование методом проточной цитометрии мононуклеарных клеток периферической крови и спленоцитов показало, что тяжелые заболевания и высокая степень инвазии сопровождаются снижением количества CD5+ Т, CD4+ Т, CD8+ Т и CD21+ В-лимфоцитов и моноцитов. В отличие от этого повышение уровня CD8+ Т-лимфоцитов является одной из главных особенностей субклинической формы инфекции и низкой интенсивности инвазии.
Лейшманиоз собак является хроническим заболеванием, и с момента заражения до появления клинических признаков заболевания может пройти от трех месяцев до семи лет. Происходит истощение Т-зон в лимфоидных органах и пролиферация В-клеток, продуцирующих антитела. Пролиферация В-лимфоцитов, плазматических клеток, гистиоцитов и макрофагов приводит к генерализованной лимфаденомегалии, спленомегалии и гиперглобулинемии. Также, как и в других случаях хронических инфекций с персистенцией внутриклеточных паразитов, развивается В-клеточный иммунный ответ с выработкой иммуноглобулинов, но, как правило, не обеспечивающий достаточную защиту и в дальнейшем могущий вызвать реакцию гиперчувствительности. Выработка аутоантител у собак с клиническими признаками лейшманиоза, как полагают, связано с развитием патологических процессов, таких как иммуноопосредованная тромбоцитопения. Выработка сывороточных антител против гистонов, обладающих антибактериальной активностью в отношении внутриклеточных патогенов, была ассоциирована с гломерулонефритом у собак с лейшманиозом. Другой потенциальной опасностью у собак с избыточной активностью В-клеток является генерация большого количества циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Осаждение таких комплексов на стенках кровеносных сосудов может привести к развитию васкулита, полиартрита, увеита и гломерулонефрита. У собак осаждение ЦИК в почках в итоге приводит к почечной недостаточности, которая является основной причиной смерти при лейшманиозе. Иммунные комплексы, которые активируют каскад системы комплемента, также вызывают васкулит. Этот важный патологический механизм, лежащий в основе развития некроза тканей и вызывающий поражения кожи, внутренних органов и глаз. Системный васкулит может привести к локальной ишемии, что вызывает висцеральный и кожный некроз и, хотя и редко, к поражению нервной системы. ЦИК могут также спровоцировать образование криоглобулинов. Эти белки осаждаются в кровеносных сосудах конечностей при воздействии холода и вызывают ишемический некроз. Лейшманиоз собак чаще всего ассоциируется с различными поражениями кожи, как правило, генерализованными, а не локальными, поскольку L. infantum распространяется по всему организму. Было отмечено снижение количества коллагеновых волокон типа I в коже больных собак и увеличение коллагеновых волокон типа III пропорционально тяжести поражения кожи и разрушению ткани. Глазные поражения включают в себя передний увеит, конъюнктивит, сухой кератоконъюнктивит, блефарит или их комбинацию. При сухом кератоконъюнктивите воспалительный инфильтрат локализуется вокруг слезных путей и вызывает задержку и снижение секреции слезной жидкости.
Наблюдаемая слабость мышц у собак, больных лейшманиозом, связана с миозитом, вызванным мононуклеарной инфильтрацией, васкулитом, обусловленным нейтрофильной инфильтрацией и образованием иммунных комплексов (с антителами класса IgG) в мышцах в сочетании с присутствием антител к миофибриллам в сыворотке крови. У собак с лейшманиозом могут развиться признаки кровотечения, проявляющиеся в первую очередь носовым кровотечением и реже в виде гематурии и геморрагической диареи. Анемия обычно развивается как следствие снижения эритропоэза при хронических заболеваниях или хронического заболевания почек, но может усугубляется потерей крови.
У собак часто наблюдается субклиническая форма инфекции, при которой не проявляются клинические признаки заболевания. Лейшманиоз собак является хроническим системным заболеванием, которое может потенциально поражать любой орган, ткань и имеет вариабельную клиническую картину. В типичных случаях при заболевании собак лейшманиозом основными клиническими признаками будут: поражения кожи, локальная или генерализованная форма лимфаденомегалии, снижение массы тела, непереносимость физической нагрузки, снижение аппетита, вялость, спленомегалия, полиурия и полидипсия, поражения глаз, носа, искривление когтей, хромота, рвота и диарея. Выделяют три формы лейшманиоза в зависимости от локализации патологического процесса: висцеральную, слизисто-кожную и кожную. Кожная форма лейшманиоза встречается в 56-90% случаев заболевания. Дерматологические симптомы могут возникать при отсутствии других явных признаков заболевания, но при этом не исключено, что у животного присутствует висцеральная форма болезни, поскольку паразиты распространяются по всему организму прежде, чем развиваются генерализованные поражения кожи. Кожные поражения различаются по характеру и степени, но редко ассоциированы с зудом.
Серологические методы исследования позволяют подтвердить наличие заболевания. Чувствительность и специфичность этих методов в значительной степени зависят от используемых антигенов. Высокий титр антител у собак с лейшманиозом обусловлен высокой интенсивностью инвазии паразитов в коже и активной формой заболевания. Антитела против Leishmania редко обнаруживаются у инфицированных собак с клиническими признаками лейшманиоза. Таким образом, высокий титр антител однозначно подтверждает диагноз и является окончательным у собак с сочетанными клиническими признаками. В случаях низкого титра антител и наличием соответствующих клинических признаков рекомендуется использовать дополнительные методы обнаружения патогена, для исключения или подтверждения заболевания, поскольку низкий титр антител у собак может обнаруживаться при субклинической форме течения заболевания.
В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических антител и родственных антигенов с образованием комплекса «антиген – антитело», который выявляют при помощи фермента. В случае нахождения в сыворотке животного антител против лейшманий происходит их связывание с антигенами, адсорбированными на поверхности лунок планшета. Количество фиксированных иммунных комплексов определяется после ряда последовательных процедур, в конечном итоге заканчивающихся колориметрической реакцией (с изменением цвета раствора в лунках), результат которой может быть измерен с помощью спектрофотометра.


ПРЕАНАЛИТИКА

Для исследования методом ИФА основным биоматериалом является сыворотка крови собак. Рекомендовано соблюдение голодной диеты в течение минимум 6 часов, так как возможно искажение результатов при сильной липемии (++++). Образец стабилен пять суток при температуре +2°С…+8°С. При более длительном хранении рекомендуется замораживание пробы.


ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Единицы измерения и значение
Исходя из величин оптической плотности (ОП) контролей вычисляются отсекающие значения (положительное и отрицательное), необходимые для правильной интерпретации результатов исследования. Величина ОП сыворотки прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.
Если в сыворотке величина ОП выше верхнего отсекающего значения, то такие животные считаются положительными (серопозитивными). Животные, в сыворотке которых ОП ниже отрицательного отсекающего значения, считаются отрицательными (серонегативными). Результаты исследования, в котором величина ОП в сыворотках собак находится в пределах между положительным и отрицательным отсекающими значениями, считаются сомнительными. В таких случаях рекомендуется повторить проведение исследования спустя 3-4 недели. Если в результате повторного исследования сыворотки величина ОП будет ниже положительного отсекающего значения, то животное считается серонегативным.