Поиск анализа

№AN16ОБС, Определение дня вязки (Прогестерон AN630 + Вагинальная цитология AN408ЦИТ)

Срок исполнения

1 рабочий день

*указанный срок не включает день взятия биоматериала

Исследуемый материал

Сыворотка крови + Вагинальная цитология

Метод определения

иммунохимический (прогестерон), микроскопия с окрашиванием стандартными методами (вагинальные мазки).

            

Определение дня вязки:

   Для определения оптимальных фертильных дней у сук необходим комплексный подход, включающий исследование вагинальных мазков с одновременным измерением уровня прогестерона. Совокупность данных методов исследования позволяет получить информацию об оптимальных днях вязки в том числе и с точки зрения получения максимального количества плодов. Не смотря на укоренившееся мнение о том, что овуляция у сук наступает на 10-13 день течки, такую ситуацию можно наблюдать далеко не у всех собак и даже в рамках нескольких течек у одного животного дни овуляции могут варьировать. Поэтому опираться на данные цифры может быть нецелесообразно, особенно в случае желания получить многоплодное потомство или же в ситуации с ограничениями фертильной способности (возрастные суки, искусственное осеменение).

   Вагинальные мазки позволяют установить фазу полового цикла, однако по ним однозначно время овуляции сказать нельзя. Это обусловлено тем, что типичное для так называемого “благоприятного времени вязки” ороговение эпителия, на которое традиционно и ориентируются, определяется не прогестероном, одновременно с повышением которого непосредственно и происходит овуляция, и не пиком лютеинизирующего гормона, который ее инициирует, а эстрогенами. Соответственно, можно наблюдать картину “благоприятного времени” по цитологическому мазку в течение нескольких дней до реального наступления овуляции, что и объясняет не всегда успешный исход при опоре только на данный метод диагностики. Однако в самом начале цикла исследование вагинальных мазков позволяет оценить вход суки в эструс, в рамках которой и происходит овуляция. Так же оценка цитологического состава мазков может помочь диагностировать воспалительные процессы (вагиниты, эндометриты, пиометру), но все же стоит помнить, что при обнаружении признаков воспаления точно установить отдел, в котором происходит процесс, только с помощью цитологии не представляется возможным. Кроме того, исключительно по мазкам иногда сложно сказать, имеем мы дело с проэструсом или метэструсом, так как цитологически они могут выглядеть идентично. Однако, уровень прогестерона при этом будет значительно отличаться. Дополнительным преимуществом исследования вагинальных мазков может быть определение скрытого эструса, что может позволить не пропустить фертильный период у суки. 

Измерение прогестерона позволяет довольно точно определить благоприятные дни фертильности, так как у сук овуляция происходит после пика лютеинизирующего гормона, который совпадает с первичным повышением прогестерона от базального уровня. Так как некоторые суки могут демонстрировать поведение готовности к вязке как за несколько дней до пика лютеинизующего гормона, так и после него, измерение прогестерона будет более точным индикатором фертильного периода. В случае, если уровень прогестерона будет ближе к метэстральному, для оценки того, можно ли успеть повязать суку с благоприятным исходом, можно исследовать вагинальный мазок на предмет выхода в метэструс. В случае картины эструса в ближайшее время можно совершить вязку с надеждой на приплод, в противном случае можно уже не прилагать усилия. 

В некоторых случаях картина вагинального мазка и уровень прогестерона могут не коррелировать (мазок эструса при базальном уровне прогестерона или мазок проэструса при значительно повышающемся прогестероне). Такие ситуации могут быть обусловлены как погрешностью взятия цитологического материала при недостаточно глубоком введении зонда или неправильном его положении во влагалище, так и протеканием патологических процессов в репродуктивной системе, нарушающих нормальный ход овуляторного цикла. Важно помнить, что вне зависимости от наступления беременности уровень прогестерона будет расти после овуляции, достигая своего пика в диэструс, и снижаться к анэструсу или родам.

Хорошим дополнительным методом диагностики для определения срока овуляции вплоть до часов является УЗИ яичников. Этот метод часто применяется в случае, когда необходимо оплодотворение замороженной спермой и число попыток ограничено.

Исследуемый материал:

Сыворотка крови на прогестерон, вагинальные мазки на стеклах.

Сроки исполнения:

1 день (плюс 1-2 дня для регионов) 

Показания:

  • определение фазы полового цикла

  • определение оптимального фертильного периода у сук

  • получение максимального приплода у сук

  • дополнительный метод диагностики репродуктивных заболеваний у сук

  • искусственное осеменение для повышения шансов на получение приплода

Подготовка пациента: 

1.       При отборе крови на анализ прогестерона необходима голодная диета не менее 12 часов.

2.       На уровень прогестерона может влиять применение содержащих гормоны препаратов (17-гидроксипрогестерон, другие прогестины, деоксикортикостерон). Экзогенные прогестины, эстроген и тестостерон подавляют синтез прогестерона. 

Метод отбора:

·         Венепункция

·         При взятии материала для цитологии важным моментом является соблюдение некоторых особенностей выполнения процедуры:

1.       Одной рукой осторожно разводят в стороны половые губы вульвы суки, другой рукой берут стерильный аппликатор с ватным тампоном. Аппликатор должен иметь длину от 13 до 18 см.

2.       Допускается смочить ватный тампон водой.

3.       Тампон вводят строго по дорсальной стенке влагалища (для избегания попадания в ямку клитора).

4.       Затем его продвигают в кранио-дорсальном направлении в сторону позвоночника до тех пор, пока он не пройдет седалищную дугу.

5.       Тампон продвигают на глубину 13-15 см, в зависимости от размеров суки, проворачивают на 360 градусов в обоих направлениях и извлекают.

6.       Затем делают 2 продольных мазка на заранее подготовленном предметном стекле.

7.       Стекло с высушенным цитологическим мазком поместить в пластиковый транспортный контейнер.

8.       Сохранность образца 3 дня. До отправки в лабораторию хранить при +20°С…+25°С.

Преаналитика:

Преаналитика: Пробирка с красной крышкой без геля для взятия крови на прогестерон (первичная пробирка), после центрифугирования сыворотку перенести в сухую чистую пробирку (эппендорф); транспортный контейнер с предметным стеклом с содержимым вагинальных мазков. Сыворотку хранить при температуре +2 +8 градусов, мазки высушить на воздухе и хранить при комнатной температуре.

Важно! Кровь на прогестерон ни в коем случае не должна браться в пробирку с гелем и должна быть своевременно разделена на компоненты, так как контакт с гелем и эритроцитами может значительно снизить результаты.

Единицы измерения:

Прогестерон (нмоль/л).

Интерпретация (собаки):

Вагинальные мазки: ранний проэструс - более 80% клеток представлено парабазальным и промежуточным эпителием, конец проэструса - 70-80% клеток представлено клетками безъядерного поверхностного эпителия, в течение всего проэструса в мазках могут присутствовать нейтрофилы и эритроциты, свободно лежащая микрофлора смешанного состава, эструс - фон мазка светлый, нейтрофилы отсутствуют, 90 и более % представлено клетками безъядерного поверхностного эпителия, чаще собранного в пласты, могут присутствовать эритроциты и смешанная микрофлора, диэструс - резкое снижение количества клеток поверхностного эпителия с преобладанием парабазального и промежуточного эпителия, в большом количестве нейтрофилы, эритроциты и микрофлора снижаются в количестве или пропадают.

Обильное количество безъядерного поверхностного эпителия вне рамок нормального эструса и проэструса может наблюдаться при наличии реминанта яичника, фиолликулярных кистах и новообразованиях яичников, экзогенном поступлении эстрагенов (препараты для лечения недержания мочи, доступ к эстрогенсодержащим кремам, гормональным препаратам владельца), контаминации плоским эпителием с кожи или клиторальной ямки.

Выраженное количество эритроцитов может наблюдаться при субинволюции плаценты, новообразовании матки или влагалища, травме репродуктивного тракта, перекруте матки (обычно при беременности).

Выраженное количество нейтрофилов без признаков сепсиса может наблюдаться в первый день диэструса, вагините. Нейтрофилы с признаками фагоцитоза микрофлоры могут присутствовать при вагините, метрите, пиометре, абортах.

При использовании цитологии вагинального мазка возможен более точный подсчет времени гестационного периода, который составляет 57 ± 3 дня, если установить первый день цитологического диэструса и вести отсчет от него.

Прогестерон:
  • Анэструс < 3 нмоль/л

  • Проэструс - 3-12 нмоль/л

  • Эструс > 13 нмоль/л

  • Овуляторный уровень - 18-25 нмоль/л

  • Диэструс >60 нмоль/л

Спустя 48-72 часа после овуляции яйцеклетки проходят стадию окончательного созревания и становятся готовыми к оплодотворению в течение 2-4 дней, этот период и носит название “фертильного”.

Измерение прогестерона должно проводиться, начиная с фазы проэструса, каждые 2-3 дня для фиксации его повышения. Первичное повышение прогестерона от анэстрального обычно совпадает с пиком лютеинизирующего гормона, оплодотворение можно планировать спустя 4-6 дней после его повышения либо спустя 24-48 часов после достижения прогестероном овуляторного уровня.

Высокий уровень прогестерона может говорить о том, что овуляция у суки имела место в последние 2 месяца, при отсутствии признаков течки или затяжном анэструсе - о бессимптомной течке или наличии лютеиновой кисты. У сук после вязки, но с отсутствием беременности высокий уровень прогестерона позволяет исключить отсутствие овуляции как причину бесплодия. 

Форма выдачи результата:

Описание цитологического состава вагинального мазка с заключением о фазе цикла, уровень прогестерона в числовых значениях.

Список источников:

1) Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat, 3rd edition by Editors: Rick L. Cowell,

Ronald D. Tyler, James H. Meinkoth, Dennis B. DeNicola, 378-389;

2) https://veteriankey.com/ovarian-cycle-and-vaginal-cytology/

3) Small Animal Internal Medicine 4th Edition, Richard Nelson C. Guillermo Couto, 2008, p.885-926