№AN1PTT, АЧТВ

Тест на АЧТВ позволяет определить время образования сгустка после добавления каолин-кефалиновой смеси и СаСl2 к бестромбоцитарной цитратной плазме.

Свертывание крови представляет собой сложный процесс, и для полной оценки коагуляционного гемостаза часто требуется проведение комплексных тестов.
Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) является показателем функционирования внутреннего (контактная активация) и общего путей свертывания. АЧТВ определяет время свертывания (в секундах) в анализируемом составе с помощью реагентов, которые специфически инициируют свертывание путем активации фактора XII. Тест измеряет ферментативную активность факторов внутреннего механизма свертывания (факторов VIII, IX, XI, XII) и факторов общей системы свертывания (факторов II, V и Х). Этот метод анализа также чувствителен к дефициту фибриногена или присутствию ингибиторов полимеризации фибрина. К возможным причинам удлинения АЧТВ относятся недостатки активности факторов внутреннего и общего путей свертывания, наличие ингибиторов свертывания и антикоагулянтов. Удлинение АЧТВ наблюдается при снижении активности факторов более чем на 30%. Поэтому измерение АЧТВ не позволяет выявлять врожденные дефекты свертывания, у которых концентрация факторов составляет от 40% до 60% от нормы. Ингибиторы свертывания могут быть специфическими по отношению к одному или нескольким факторам свертывания или могут оказывать неселективное ингибирование компонентов свертывания.
К специфическим ингибиторам коагуляционного гемостаза, прежде всего, относятся иммуноглобулины, направленные против одного или более антигенных сайтов на определенном факторе свертывания. Они обычно появляются при иммуноопосредованных заболеваниях (например, системной красной волчанке), лимфопролиферативных заболеваниях или после переливания крови (т. е. при аллоиммунизации). Неспецифические ингибиторы коагуляции включают в себя яды животного происхождения, продукты деградации фибрина (ПДФ) и плазмозаменители, которые подавляют активность факторов свертывания и образование фибрина. Определение момента образования фибрина (конца реакции) основано на определении светопропускания и изменении упругости сгустка с помощью лабораторного оборудования.

Исследование проводится:

• При скрининге для выявления пониженной активности факторов свертывания крови (например, при гемофилии, ДВС-синдроме, приобретенном дефиците витамина К, печеночной недостаточности, отравлении варфарином).
• Для оценки состояния животных с острой или хронической геморрагией, особенно при полостном кровотечении, обширных гематомах и/или кровоизлиянии в полость суставов.
• В скрининговом тесте с целью обнаружения ингибиторов свертывания крови.
• В качестве лабораторного мониторинга при применении нефракционированного гепарина (НФГ).

ПРЕАНАЛИТИКА

Для определения АЧТВ исследуется безтромбоцитарная плазма крови. Кровь берут в пробирку с голубой крышкой с содержанием цитрата натрия 3,2% (предоставляется лабораторией ИНВИТРО), обязательным преаналитическим условием является соблюдение пропорций кровь: антикоагулянт (9:1). Для исследования гемостаза НЕ допускается использование пробирок с другими антикоагулянтами: литий-гепарином, натрий-гепарином, ЭДТА. Также НЕ допускается взятие крови из внутривенного катетера (внутренняя поверхность обработана гепарином!). Перед взятием крови животное выдерживается на голодной диете в течение 12 часов. Венепункция проводится с соблюдением правил асептики и антисептики, однако необходимо учитывать, что некоторые дезинфицирующие вещества (например, спирт) при контакте с кровью могут вызвать ятрогенный гемолиз. В связи с этим после обработки поверхности кожи дезинфинктантом венепункцию рекомендуется проводить после полного его испарения. При взятии крови самотеком у животных одновременно для нескольких видов исследований необходимо помнить:

1. Первая капля крови, содержащая тканевой тромбопластин, смахивается марлевым тампоном.
2. Далее кровь собирается в пробирки в следующем порядке: в пробирку с голубой крышкой; с сиреневой крышкой; с зеленой крышкой; с красной крышкой; с серой крышкой.

Пробирку наполнить кровью СТРОГО до отметки на бумажной этикете. После взятия аккуратно перевернуть пробирку с голубой крышкой 4–6 раз для смешивания крови с антикоагулянтом. При плохом перемешивании крови с антикоагулянтом в пробирке может образоваться сгусток крови. В том случае, если уровень крови не достигает или превышает отметку на этикетке, если кровь свернулась в пробирке, требуется повторное взятие крови. Определение АЧТВ с такими преаналитическими ошибками не проводится! Обязательным требованием является отделение плазмы от форменных элементов крови в течение 30 минут после взятия крови. Режим центрифугирования: в течение 20 минут при 2000 об/мин. Если доставка пробы в лабораторию в течение 2 часов после взятия невозможна, плазму переносят в чистую пластиковую пробирку (эппендорф) и замораживают. Стабильность АЧТВ в плазме крови после центрифугирования и переноса в пластиковую пробирку составляет: при +2…+4 ⁰С — 4 часа; при -17…-23 ⁰С — 2 недели. Транспортировка в лабораторию осуществляется при соблюдении температурного режима хранения пробы.
Выраженный гемолиз или липемия могут влиять на точность результатов исследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей и дополнительных сведений.

Единицы измерения: секунды.

Референсные значения:
Собаки: 9–23 сек.
Кошки: 9–30 сек.

Удлинение АЧТВ:

Приобретенные дефициты факторов свертывания.
Дефицит витамина К (мальабсорбция, несварение, длительное пероральное применение антибиотиков).
Использование кумадина (варфарина) в дозах, превышающих рекомендованные.
Холестаз.
Печеночная недостаточность.
Поедание родентицидов-антикоагулянтов (например, антагонистов витамина К).
Тромбоэмболия (локальная или диссеминированная, расходование факторов).
Гепаринотерапия.
Наследственный дефицит факторов свертывания.
Дефицит фактора VIII (гемофилия, А): наиболее распространенная коагулопатия, встречающаяся у животных всех пород, наследуется как Х-сцепленный рецессивный признак.
Дефицит фактора IX (гемофилия В): встречается у животных всех пород, наследуется как Х-сцепленный рецессивный признак.
Дефицит фактора XI.
Дефицит фактора XII (фактора Хагемана).
Дефицит витамин К-зависимых факторов, одновременное удлинение АЧТВ и МНО.
Недостаток факторов контактной фазы свертывания: прекалликреин и кининоген вызывают удлинение времени свертывания (in vitro), не вызывая тенденцию к кровотечению.
Приобретенные циркулирующие антикоагулянты.
Образование антител к факторам свертывания.
Повышение продуктов дегенерации фибрина.
Змеиные яды.
Волчаночный антикоагулянт (не вызывает кровотечения).

Преаналитические ошибки:

Искусственное удлинение АЧТВ при взятии крови в пробирки с гепарином (с зеленой крышкой) и ЭДТА (с сиреневой крышкой), взятие крови через внутривенный катетер, несоблюдение пропорций кровь: антикоагулянт.

Неточность результатов:

Получение неточных результатов связано с недостатком или избытком цитратного антикоагулянта при увеличении или уменьшении HCT (гематокрита).

Укорочение АЧТВ:

Не имеет клинического значения.