Поиск анализа

№AN322ПРК, Вирус чумы плотоядных (CDV)

Срок исполнения

2 дня (плюс 1-2 дня для регионов)

*указанный срок не включает день взятия биоматериала

Исследуемый материал

эпителиальные клетки со слизистой оболочки прямой кишки

Метод определения

PCR-Real time

            

Чума плотоядных – острая контагиозная вирусная болезнь домашних собак и диких животных (многих видов отряда хищных), имеющая большое ветеринарное значение. Заболевание вызывается вирусом чумы плотоядных (Canine Distemper Virus, CDV), который является оболочечным, плеоморфным РНК-содержащим вирусом, принадлежащим роду Morbillivirus (семейство Paramyxoviridae).

  1. Показания и противопоказания
  2. Подготовка пациента
  3. Интерпретация и форма выдачи результата

CDV родственен вирусу кори и вирусу чумы крупного рогатого скота и использовался в качестве модели при изучении патогенеза кори. Вирусная оболочка состоит из трех белков: гемагглютинина (Н), белка слияния (F) и матриксного белка (М). Именно Н-белок играет определяющую роль в присоединении вируса к клеткам и проникновении в них. Инфекция у собак может протекать в форме тяжелого заболевания, поражающего различные системы организма ‒ пищеварительную, респираторную и нервную.

Хорьки восприимчивы к заболеванию, в то время как у кошек оно не встречается. Вирус, выделяемый дикими животными (например, енотами), может поражать домашних собак, а вирус, выделяемый домашними собаками, представляет значительную опасность для диких животных, вызывая вспышки заболевания с высоким уровнем смертности. Вирус чумы плотоядных также является одним из патогенов, вызывающих комплекс респираторных инфекций собак (КРИС).

В мире существуют минимум восемь линий вируса чумы плотоядных (иначе называемых генотипами, или кладами), которые были определены по результатам секвенциального анализа H гена: Азия-1, Азия-2, Америка-1, Америка-2, Европа-1/Южная Америка-1, Европа-2 (дикие животные Европы), Европа-3 (Арктика) и Южная Африка.

Благодаря использованию вакцинации инцидентность заболевания снизилась, но чума плотоядных по-прежнему остается значительной проблемой, особенно в условиях совместного содержания большого числа молодых собак с недостаточной функцией иммунной системы, например, в приютах и питомниках.

В регионах, где проводится вакцинация, к заболеванию восприимчивы щенки, утратившие материнские антитела. В некоторых случаях болезнь развивается у вакцинированных собак старшего возраста. Чума плотоядных чаще встречается в регионах, где вакцинация собак не проводится, либо проводится некорректно. Будучи оболочечным вирусом, CDV восприимчив к действию факторов внешней среды (сохраняет жизнеспособность в течение менее одного дня при комнатной температуре) и быстро инактивируется при температурном воздействии, высушивании и действии дезинфектантов. Поэтому важным путем передачи вируса является прямая передача при контакте с инфицированными собаками.

Вирус вначале поражает моноциты лимфоидной ткани верхнего отдела дыхательных путей и миндалин, после чего с лимфой и кровью распространяется по всей ретикулоэндотелиальной системе. Вирусный гемагглютинин связывается с сигнальной молекулой активации лимфоцитов (Signaling lymphocyte activation molecule, SLAM) на поверхности клеток хозяина. SLAM представляет собой мембранный гликопротеин, принадлежащий надсемейству иммуноглобулинов. Он обеспечивает проникновение CDV в клетку и играет ключевую роль в патогенезе чумы плотоядных. SLAM экспрессируется незрелыми тимоцитами, активированными лимфоцитами, макрофагами и дендритными клетками. В крови, миндалинах, тимусе, селезенке, лимфоузлах, костном мозге, лимфоидной ткани слизистых оболочках и клетках Купфера происходит прямое разрушение вирусом значительной доли популяции лимфоцитов, прежде всего, CD4+ T-клеток. Разрушение большого числа лимфоцитов ведет к развитию лимфопении и перемежающейся лихорадки в течение нескольких дней после инфицирования. Впоследствии наступает вторая фаза клеточной виремии и лихорадки (через 8-9 дней после инфицирования), когда CDV поражает клетки респираторного и желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы, мочевыводящих путей и кожи, а также эритроциты и лейкоциты, включая клетки лимфоидной ткани. На данной стадии инфекции CDV поражает различные типы клеток, в том числе эпителиальные, мезенхимальные, нейроэндокринные, гематопоэтические и способствует образованию цитоплазматических и ядерных включений.

Поражение эпителиальных клеток происходит на сравнительно поздних стадиях болезни и осуществляется с помощью независимого от SLAM механизма, в котором, очевидно, задействован нектиновый рецептор. CDV выделяется со всеми секретами и экскретами, начиная с пятого дня после инфицирования до появления клинических признаков. Выделение вируса может продолжаться в течение 3-4 месяцев, но обычно прекращается через 1-2 недели.

Клинические признаки чумы плотоядных у собак характеризуются значительной вариабельностью и зависят от штамма вируса, возраста и иммунного статуса животного, а также наличия сопутствующих бактериальных или вирусных инфекций. У многих собак инфекция протекает в субклинической форме, в то время как у других наблюдается быстрое прогрессирование заболевания и смерть. Инкубационный период составляет от трех до шести дней.

Диагностировать чуму плотоядных проще у собак, у которых присутствует полный спектр клинических нарушений, прежде всего, миоклонус, поскольку существуют другие заболевания со сходной клинической картиной. У собак с респираторными, желудочно-кишечными и неврологическими симптомами прижизненная диагностика чумы более затруднительна ввиду низкой специфичности данных симптомов. Иммунизация с использованием аттенуированных живых вакцин может быть причиной получения ложноположительных результатов. Для постановки окончательного диагноза требуется комбинированное использование методов лабораторной диагностики, получение отрицательного результата при этом не всегда позволяет исключить чуму.

Для повышения точности исследований при обнаружении вируса CDV используются несколько образцов биоматериала из различных анатомических областей, например, кровь, моча, мазки с конъюнктивы и спинномозговая жидкость (СМЖ). У собак с респираторными симптомами наличие конъюнктивита, блефароспазма и выделений из глаз должно вызывать подозрение на наличие чумы. Чума всегда должна подозреваться у молодых собак с неврологическими признаками независимо от наличия респираторных и желудочно-кишечных симптомов. У хорьков чума в большинстве случаев протекает в виде кожной и легочной форм, и, к сожалению, более чем в 90% заканчивается гибелью животного. Кожная форма проявляется поражениями кожи – на животе, в паху и на внутренней поверхности бедер появляются гнойнички. Кожа носового зеркала и подушечек лап становится сухой, трескается и воспаляется. При легочной форме страдают органы дыхания. Могут развиться трахеит (воспаление трахеи), бронхит (воспаление бронхов), пневмония (воспаление легких), бронхопневмония. У животного наблюдается кашель, сопровождающийся хрипами.

Для диагностики CDV методом ПЦР используют биоптаты кожи, конъюнктивальные соскобы, СМЖ, смывы с трахеи, мазки со слизистой носовой полости и глотки, а также разнообразные образцы, получаемые во время посмертного вскрытия (образцы легких, тонкого кишечника, желудка, почек, головного мозга, мочевого пузыря, лимфоидной ткани).

Срок исполнения: 2 дня (плюс 1-2 дня для регионов)

Исследуемый биоматериал: эпителиальные клетки со слизистой оболочки прямой кишки.

Метод определения: PCR-Real time

Метод отбора биоматериала: взятие соскоба с помощью урогенитального зонда.

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов;

- не рекомендуется взятие соскобов после применения средств, облегчающих введение термометра;

- не рекомендуется взятие соскоба, если животное получает сорбенты.

Показания: рвота, водянистая диарея, обезвоживание, угнетение, гипертермия, дерматиты, одышка, хрипы, кашель.

Противопоказания: не известны.

Преаналитика:

  1. Урогенитальный зонд аккуратно ввести на глубину 0,5 см в прямую кишку и вращательными движениями набрать клеточный материал со слизистой оболочки.
  2. Перенести зонд в микропробирку с транспортной средой, вращательными движениями «смахнуть» биоматериал в жидкость, зонд утилизировать. Если зонд оставляется в пробирке, длина отрезанного зонда не должна мешать плотному закрыванию крышки пробирки!
  3. Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
  4. Заполнить все графы направительного бланка.
  5. Сохранность образца 10 дней при +2°С …+8°С.
  6. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный тест.

Результат исследования: Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе целевой участок РНК Canine Distemper Virus (CDV). Возможно получение ложноотрицательных результатов в случае низкой концентрации вируса в исследуемых образцах. Ввиду лабильности РНК возможен ее распад при отборе пробы и транспортировке образцов, что также может быть причиной получения ложноотрицательных результатов.

Литература:

  1. Craig E. Greene, DVM, MS, DACVIM, INFECTIOUS DIESEASES OF THE DOG AND CAT, FOURTH EDITION;
  2. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф. Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.
  3. BSAVA Manual of Rodents and Ferrets by Emma Keeble Anna Meredith April 2009;
  4. Biology and Diseases of the Ferret, 3rd Edition by James G. Fox, Robert P. Marini
    March 2014