Цитологическое исследование венозной крови (наличие патологических клеток + общий анализ крови)

В рамках рутинной микроскопии мазка клинической крови акцент делается на дифференциальный подсчет соотношения клеточных популяций (лейкоформулу), в цитологическом исследовании более детальное внимание уделяется именно морфологии клеточных элементов и описанию нетипичных для периферической крови клеток. Оценка морфологии эритроцитов дает «ключ» к пониманию этиологии процесса, особенно анемии, а также помогает опосредованно оценить силу регенеративного ответа организма на нее. Более точным методом степени данного ответа является дополнительный метод окраски для оценки количества ретикулоцитов. Кроме того, наличие включений разного рода может говорить о гемопаразитарном заболевании и необходимости применения дальнейших более точных методов диагностики (например, ПЦР в случае с гемотропными микоплазмами). При оценке морфологии лейкоцитов можно выявить включения, подозрительные в отношении паразитов, а также свидетельствующие о разного рода болезнях накопления, оценить гипо- и гиперсегментацию ядер и степень токсических изменений. Выявление диспластических изменений в той или иной клеточной линейке, а также выраженного количества ядерных форм эритроцитов в отсутствие регенеративного ответа (что, к тому же, нередко приводит к ошибкам подсчета анализатором количества лейкоцитов), может говорить о токсичности костного мозга. В случаях выявления клеток с морфологией, нетипичной для обычно встречающихся в периферической крови клеточных элементов, цитолог сможет предварительно  отнести их к той или иной популяции (например, наличие большого количества мастоцитов при мастоцитемии, обнаружение больших гранулярных лимфоцитов при алиментарной лимфоме у кошек, атипичной лимфоидной популяции при диссеминации лимфомы), однако зачастую бластные клетки даже опытный морфолог не сможет отнести к определенной популяции без дополнительных методов диагностики. Таким образом, цитологическое исследование крови нередко позволяет уже на этом этапе остановиться на предварительном диагнозе лейкоза, особенно в случаях с острыми состояниями.

Подготовка пациента: не кормить животное за 8 часов до забора крови.

Показания: выявление при ОАК в мазке крови клеток с атипичной морфологией и клеток, отсутствующих в норме (бластные клетки, гранулярные лимфоциты, мастоциты и т.д.).

Противопоказания: неизвестны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика:

Порядок действий:

1. Провести венепункцию.

2. Заполнить пробирку с сиреневой крышкой / Калий ЭДТА периферической кровью СТРОГО до отметки на этикетке (нарушение пропорции цельная кровь/ЭДТА приводит к изменению показателей и морфологии клеток).

3. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом. Не допускать образования сгустков в пробирке!

4. Сделать 1-2 мазка на стекле так, чтобы мазок содержал область щетки (забрать 5 мкл крови и нанести на стекло оставив отступ для маркировки при отсутствии окна для подписи, аккуратно распределить жидкость шпателем, без давления и отрыва шпателя от стекла).

5. Высушить мазки на воздухе в течение 15 минут.

6. Подписать предметные стекла (вид, кличка животного, фамилия владельца), положить в маркированный транспортный контейнер.

7. Заполнить все поля лицевой стороны направительного бланка. С обратной стороны описать клиническую картину, подробный анамнез или приложить выписку из истории болезни.

8. Направить в лабораторию 1 пробирку с ЭДТА + мазки на стеклах.

9. Хранение стекол до отправки  +20…+25°С ,  хранение и   транспортировка пробирки  +2°С…+8°С (синий пакет).

ВНИМАНИЕ! Минимальный объем крови необходимый для исследования - 1 мл

Интерпретация результата: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Эритроциты:

• Анемия – это уменьшение количества эритроцитов по сравнению с установленными референсными значениями, которое характеризуется снижением гематокрита, общего количества эритроцитов, концентрацией гемоглобина.
• Регенераторный ответ, возникающий в ответ на кровопотерю. Характерным признаком регенерации является наличие полихроматофилов – незрелых эритроцитов, окрашивающихся в фиолетовый цвет красителями по Романовскому (они же называются ретикулоцитами): при окраске суправитальными красителями в данных клетках будет визуализироваться остаток ядерной РНК.
• Отсутствие регенерации говорит о нерегенераторной анемии, возникающей вследствие недостаточной продукции эритроцитов красным костным мозгом.
• Иммунноопосредованные повреждения эритроцитов характеризуются наличием агглютинации, сфероцитов, клеток-теней. Агглютинация – это склеивание эритроцитов между собой, при котором образуются трехмерные кластеры. У лошадей агглютинация может возникать не только при аутоиммунных заболеваниях, но и после применения гепарина. Сфероциты формируются путем захватывания макрофагами клеточной мембраны, содержащей антитела, в результате чего клетка не может сохранять дискоидную форму. Клетки-тени – это эритроциты, подвергшиеся внутрисосудистому гемолизу.
• Оксидативное повреждение эритроцитов возникает при различных патологических процессах, а также при применении некоторых препаратов.
• Тельца Хайнца и эссентроциты возникают в результате повреждения и денатурации мембраны эритроцита.
• Метаболические/мембранные нарушения являются результатом воздействия на эритроцит внешних факторов. Эхиноциты – это наиболее распространенная форма эритроцитов, характерная для метаболических заболеваний, в частности, заболеваний почек. Стоит отличать истинные эхиноциты от артефакта in vitro. Также при метаболических нарушениях обнаруживаются и другие формы: элиптоциты, эхиноэлиптоциты, кератоциты, акантоциты, кодоциты, тороциты, стоматоциты и т.д.
• В результате механического повреждения эритроцитов (например, при микроваскулярных патологиях, внутрисосудистом свертывании, миелофиброзе) могут образовываться шистоциты и дакриоциты.
• Также при исследовании венозной крови могут обнаруживаться паразитарные включения в эритроцитах (кровепаразиты). Их стоит отличать от артефактных находок.
• Метарубрициты могут обнаруживаться в норме (до 3 клеток на 100 лейкоцитов) при исследовании мазка венозной крови. Повышенное количество метарубрицитов может говорить о выраженной регенерации, а при значительном повышении их количества – о повреждении синусов костного мозга в результате отравления свинцом или в результате воздействия других повреждающих факторов (часто у кошек с FeLV).
• Более незрелые стадии ядерных эритроцитов могут быть обнаружены при некоторых миелопролиферативных заболеваниях, таких как эритролейкемия, а иногда и при выраженно регенеративных анемиях, которые иногда наблюдаются у кошек с инфекцией Mycoplasma hemofelis.

Лейкоциты:

• Токсические изменения нейтрофилов: диффузная базофилия цитоплазмы, вакуолизация цитоплазмы (пенистая цитоплазма), тельца Жоле, токсическая грануляция, появление кольцевидных ядер.
• Гигантские нейтрофилы могут обнаруживаться как при токсических изменениях, так и при миелодиспластическом синдроме. Также подобные изменения встречаются при макроцитозе у пуделей.
• Также в нейтрофилах иногда можно обнаружить паразитарные включения (при чуме плотоядных, эрлихиозе и др.).
• Реактивными лимфоцитами являются иммуностимулированные лимфоциты с усиленным синтезом медиаторов воспаления и/или иммуноглобулинов (антител). Реактивные лимфоциты в периферической крови предполагают активную, системную антигенную стимуляцию, вторичную как для инфекционных, так и неинфекционных заболеваний.
• Плазмоцитоидные реактивные лимфоциты указывают на сильное, хроническое, системное воспаление, но этиологически неспецифичны.
• Большие гранулированные лимфоциты могут присутствовать в малых количествах в периферической крови у клинически здоровых собак и кошек. Увеличение числа может происходить при хронической иммунной стимуляции (особенно при хроническом эрлихиозе у собак). Когда в периферической крови присутствует умеренное или большое количество гранулярных лимфоцитов, после исключения инфекционного заболевания следует рассматривать в качестве дифференциального диагноза гранулированный лимфоцитарный лейкоз или циркулирующие неопластические клетки из лимфомы гранулярного происхождения.
• Мастоциты в норме могут обнаруживаться в мазке крови в единичных количествах. Повышенное количество может указывать на наличие мастоцитомы (часто, особенно у кошек) или вспалительную пролиферацию тучных клеток (редко, у собак).
• Сидеролейкоциты иногда наблюдаются на мазках периферической крови с таким нарушением, как иммуноопосредованная гемолитическая анемия (ИОГА, IMHA), а также после переливания крови.

Тромбоциты:

• Агрегация тромбоцитов часто является артефактом in vitro.
• Активированные тромбоциты также часто являются артефактом.
• Макротромбоциты у кошек в небольшом количестве обнаруживаются в норме. Увеличение количества макротромбоцитов у собак с тромбоцитопенией предполагает усиление тромбопоэза; однако эта находка также встречается при миелопролиферативных и миелодиспластических заболеваниях. Макротромбоциты также можно обнаружить в мазках крови здоровых животных с наследственными дефектами функции тромбоцитов. У некоторых Кавалер Кинг Чарльз Спаниелей встречается врожденная макротромбоцитопения, которая является доброкачественным наследственным заболеванием.

Лейкемия характеризуется клональной пролиферацией неопластических клеток, происходящих из костного мозга. Наиболее частой находкой у кошек и собак является лимфоидная лейкемия (острая или хроническая); неоплазии других клеточных линий встречаются реже. Окончательный диагноз может часто требовать оценки костного мозга, а также других дополнительных исследований (PARR, проточная цитометрия), поскольку световая микроскопия часто не позволяет классифицировать лейкемии на основании морфологии клеток (особенно актуально для острых форм лейкемии, т.к. клетки различных линий могут казаться морфологически идентичными).

Существуют две большие категории лейкемии: лимфоидная и миелоидная (нелимфоидная) лейкемия, с острыми и хроническими формами в каждой категории. Острые лейкемии характеризуются наличием в периферической крови незрелых клеток. Этот тип лейкемии проявляется остро, агрессивен, часто связан с большим количеством циркулирующих бластов, цитопениями периферической крови, периодической инфильтрацией вторичных органов и более неблагоприятно прогнозом по сравнению с таковым при хронических лейкозах.

Форма выдачи результата: бланк содержит описание клеточного состава венозной крови, оценку морфологии клеточных элементов, результаты количественного определения ретикулоцитов, а также заключение и комментарий, в котором указываются вероятные причины того или иного состояния.

1. Cowell and Tyler's Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat, 4th Edition (Cowell, Tyler), 2014.
2. Veterinary Hematology Atlas of Common Domestic and Non-Domestic Species 3rd Edition (Reagan, Rovira, DeNicola).