Антитела класса IgG к коронавирусной инфекции кошек (тИФА)

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis, FIP) — чрезвычайно тяжелая форма течения коронавирусной инфекции, получившая свое название из-за наиболее часто встречающегося клинического проявления: воспаления брюшной полости (перитонита). Возбудитель данной инфекции — РНК-содержащий вирус порядка Nidovirales семейства Coronaviridae рода Coronavirus вида Felinae Coronavirus (FCoV). В эту группу входят также таксономически близкие коронавирусы: вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ВТГС, TGEV) и коронавирус собак (CCV).

Болеют кошки всех возрастов, но наиболее чувствительны к заболеванию молодые животные в возрасте до 2 лет, а также взрослые старше 10 лет. Количество зарегистрированных случаев ИПК не зависит от времени года (не наблюдается сезонности заболевания), соотношение по полу больных животных существенно не отличается (болеют как коты, так и кошки), особой чувствительностью к инфекции обладают кошки британской породы голубого и серого окраса. Не отмечено какой-либо устойчивости к инфекции у беспородных животных. Клинически болезнь проявляется в двух формах: влажной (инфузионной), сопровождающейся скоплением экссудата в брюшной и/или плевральной полостях, и сухой (неинфузионной), проявляющейся в гранулематозном поражении внутренних, преимущественно паренхиматозных органов и не сопровождающейся накоплением экссудата в полостях тела. Инфузионный ИПК считается классической формой проявления и составляет приблизительно 75% клинических случаев. ИПК может иметь длительный инкубационный период (от одной недели до полугода), во время которого клинические признаки не наблюдаются. Кроме того, существует скрытая форма заболевания, при которой возможно выделение вируса во внешнюю среду. Передача вируса от больных животных происходит вертикально (трансплацентарно), либо горизонтально (контактно от животного к животному или через предметы ухода).

Первоначально коронавирус попадает в ротовую или носовую полость, где в фарингеальных эпителиальных клетках происходит первичная репликация вируса. Затем вирус проникает в клетки столбчатого эпителия кишечника — основное место его размножения и персистенции. При таком варианте заражения инфекция может протекать бессимптомно или проявляться в виде энтерита, легкого недомогания, диареи, снижения аппетита и не представляет опасности для жизни животного. Кошки с персистирующей коронавирусной инфекцией являются основным источником вируса, выделение которого может происходить со слюной, мочой, но основное количество выделяется с калом.

Однако в некоторых случаях коронавирус приобретает способность поражать моноциты и макрофаги, и тогда инфекционный процесс формируется совершенно по другому пути, приводящему к развитию ИПК. После попадания в макрофаги, вирус разносится по всему организму. Пораженные макрофаги скапливаются под серозной оболочкой стенок кровеносных сосудов, вызывая системный васкулит, что приводит к повышению проницаемости сосудов и скоплению выступающей жидкости (выпота) в полостях тела (инфузионная форма ИПК). В случае незначительного поражения кровеносных сосудов паренхиматозных органов (печени, селезенки, легких, брыжеечных лимфатических узлов, стенок кишечника, поджелудочной железы, увеального глазного тракта) происходит образование отдельных пиогранулем (гранулематозная, сухая форма ИПК). Обе формы заболевания могут привести к смерти животного.

Изменение тропности коронавируса и поражение макрофагов — ключевого компонента в системе иммунной защиты организма — является основной причиной, обуславливающей тяжесть заболевания ИПК. Заражение макрофагов приводит к так называемому антителозависимому усилению инфекции. Поскольку макрофаги, содержащие вирус, не экспрессируют вирусные антигены на поверхности, то специфические антикоронавирусные антитела (АТ) не узнают инфицированные вирусом клетки. В то же время, сывороточные иммунные комплексы АТ с вирусом продолжают распространять вирус в организме и инфицировать макрофаги. Таким образом, наличие АТ не только не защищает, но и, напротив, способствует развитию ИПК.

Сложность серологической диагностики ИПК связана с тем, что большой процент здоровых кошек имеют АТ против коронавирусов: 20–60% среди домашних животных и до 100% у животных из приютов или питомников. Установлено, что тяжесть клинических проявлений при ИПК имеет прямую корреляцию с величиной титра АТ к возбудителю заболевания. Другими словами, важен не сам факт наличия в сыворотке крови АТ к коронавирусу, а высокий уровень титров с тенденцией к быстрому нарастанию. Однако, необходимо помнить, что некоторые кошки, которые будут иметь клиническое проявление ИПК и не будут иметь АТ к возбудителю.

Широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) для определения точной величины титра АТ к вирусу ИПК. Метод основан на взаимодействии иммобилизованного в лунках планшета антигена коронавируса со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к IgG кошки). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.

Для уточнения диагноза проводят повторные исследования клинического материала с интервалом 2–4 недели. Снижение или увеличение титра АТ напрямую связано с течением инфекционного процесса. Диагностика инфекционного перитонита должна осуществляться комплексно, с учетом клинических признаков и результатов серологических и других видов исследований.

Срок исполнения: 4 дня (плюс 1-2 дня для регионов)

Исследуемый аналит: сыворотка крови

Метод исследования: твердофазный иммуноферментный анализ (тИФА)

Показания:

• энтериты неясной этиологии;
• увеиты:
• выпоты в полости;
• гипертермия;
• иктеричность слизистых оболочек;
• анорексия;
• подобранные с улицы животные;
• контактировавшие с больными животными

Противопоказания: отсутствуют.

Подготовка пациента: требуется голодная диета 10-12 часов

Метод отбора: венепункция

Преаналитика:

Порядок действий:

1. Взятие крови – пробирка с красной крышкой с гелем, 2.5 мл.
2. Осторожно перевернуть пробирку 4-6 раз. 
3. Пробирку оставить в вертикальном положении на 30 минут при комнатной температуре.
4. Центрифугировать при 3300 об/мин. 10 мин, не позднее 60 минут после взятия.
5. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента.
6. Стабильность образца: 3 дня при +2°С…+8°С; не менее 2 месяцев при -17°С…-23°С (при хранении более 5 дней сыворотку необходимо отлить в пустую чистую пробирку с белой крышкой);
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КРОВИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.5 МЛ

Интерпретация: 

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно, так как в редких случаях антитела могут не обнаруживаться тест-системами.

Форма выдачи результата: тест количественный. Результат выдается: «отрицательно» при не обнаружении АТ; при обнаружении АТ результат представлен полученным титром.

Отрицательно: антитела в исследуемом образце (сыворотка крови) не обнаружены.

Титры коронавируса у кошек
1. 1:200 - в исследуемом образце (сыворотка крови) обнаружены антитела к коронавирусам кошек. Данный титр следует считать фоновым и интерпретировать как отрицательный диагноз на ИПК (инфекционный перитонит кошек).
2. 1:400 - в исследуемом образце (сыворотка крови) обнаружены антитела к коронавирусам кошек. Данный титр следует считать фоновым и интерпретировать как отрицательный диагноз на ИПК.
3. 1:800 - Данный титр свидетельствует о возможной инфицированности животного как вирусом ИПК, так и другими коронавирусами кошек (энтеральным или ксеногенными коронавирусами), а также может указывать на латентную форму болезни или носительство. Целесообразно провести повторное исследование через 2–4 недели. Нарастание титра антител за этот период, свидетельствует о развитии инфекционного процесса, характерного для ИПК.
4. 1:1600 - Данный титр свидетельствует о возможной инфицированности животного как вирусом ИПК, так и другими коронавирусами кошек (энтеральным или ксеногенными коронавирусами), а также может указывать на латентную форму болезни или носительство. Целесообразно провести повторное исследование через 2–4 недели. Нарастание титра антител за этот период, свидетельствует о развитии инфекционного процесса, характерного для ИПК
5. 1:3200 - Данный титр является диагностическим для ИПК. Целесообразно провести повторное исследование через 2–4 недели. Если при повторном исследовании первоначальный титр сохраняется или снижается - диагноз на ИПК считать отрицательным.
6. 1:6400 - Данный титр позволяет предполагать ИПК.

---

Список источников: