Цитологическое исследование бронхоальвеолярного лаважа

Во время бронхоскопии часто проводится бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) – это ценное диагностическое исследование, позволяющее определить причину воспаления в бронхиальном дереве или выявить онкологию на ранних стадиях. В данном случае, собираются образцы из дистальных дыхательных путей и альвеол и чаще всего используется для диагностики диффузных и/или хронических патологических процессов в нижних дыхательных путях. В этих случаях образцы, собранные с любой стороны легкого, считаются репрезентативными для всего легкого. В качестве альтернативы БАЛ, можно собирать с помощью эндоскопа, который позволяет более точно выбирать место для промывания, особенно при подозрении на локализованную патологию легких. Образцы, полученные с помощью БАЛ, чаще всего оцениваются цитологически, хотя в редких случаях может быть также показано культивирование образцов, а также ПЦР-исследование образцов.

Бронхоскопия является отличным методом получения образца БАЛ. Для использования этого метода необходимо специальное оборудование, и животное должно быть достаточного размера, чтобы можно было разместить бронхоскоп за пределами главного бронха. Сообщалось, что использование гибких эндоскопов с внешним диаметром менее 5 мм для бронхоскопии у кошек позволяет получать высокодиагностические образцы БАЛ с минимальными осложнениями. Животное должно находиться под общим наркозом. После установки эндотрахеальной трубки, через нее вводится фибробронхоскоп, что позволяет визуализировать трахею и главные бронхи. Если перед бронхоскопией были сделаны рентгенограммы, можно выбрать определенные доли легкого на основе локализации или тяжести поражения. Подогретый стерильный физиологический раствор вводится через биопсийный канал в объеме, равном 5 мл/кг, и можно аспирировать в тот же шприц, применяя осторожное отсасывание. Физиологический раствор можно вводить в виде одного большого болюса или в виде двух-трех аликвот.

Несколько долей легкого следует промыть, чтобы увеличить возможность выявления этиологических агентов или клеток с критериями злокачественности. Рекомендуется держать животных на дополнительном кислороде после процедуры, если не во время, чтобы снизить риск гипоксии. Преимущества этого метода включают возможность визуализировать дыхательные пути. Образцы из нескольких областей легкого часто объединяют, это может повысить чувствительность обнаружения неопластических клеток или инфекционных агентов с диффузным заболеванием. Однако для животных при очаговом или сегментарном заболевании цитологическая картина, включая общее количество клеток и дифференциал клеток, часто очень разная. Следовательно, может оказаться более клинически значимым обрабатывать и оценивать образцы из разных участков легких отдельно, чтобы максимизировать идентификацию основного патогенеза, выбрать долю для промывания и биопсийные массы, если они наблюдаются.

Если бронхоскоп недоступен или пациент слишком мал для того, чтобы пропустить бронхоскоп через эндотрахеальную трубку или за ее пределы, БАЛ может быть выполнен через эндотрахеальную трубку. Процедура была хорошо описано для кошек, но может быть выполнена и для собак. Опять же, требуется общая анестезия. После интубации животное должно быть помещено в боковое положение наиболее пораженной стороной вниз. После надувания манжеты эндотрахеальной трубки, к концу трубки прикрепляется адаптер шприца. Следует использовать три отдельные аликвоты жидкости (теплый, стерильный физиологический раствор) общим объемом 5мл/кг. Первую аликвоту следует вводить быстро, а затемнемедленно применять отсасывание с помощью того же шприца до тех пор, пока не перестанет выделяться жидкость. Эту процедуру повторяют для второй и третьей аликвот. Заднюю часть животного можно приподнять, чтобы облегчить извлечение жидкости. БАЛ приводит к локализованному отеку, альвеолярному расширению, легкой или умеренной конгестии и альвеолярному коллапсу. Основным осложнением методов БАЛ является транзиторная гипоксия, которая связана с уменьшением соответствия и несоответствием вентиляции/перфузии.

Подготовка пациента:

• Утром перед исследованием животное не кормить. Так как процедура бронхо-альвеолярноголаважа проводится под общей седацией, пациента необходимо подготовить в соответствии с соблюдением всех требований, в зависимости от группы анестезиологического риска.

• Биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов.

• Техника взятия должна проводиться с соблюдением правил асептики/антисептики для минимизирования возможной контаминации из верхних дыхательных путей.

Показания:

• хронический бронхит собак и кошек (бактериальной, паразитарной природы);

• эозинофильная бронхопневмония собак;

• астма кошек;

• пневмония;

• опухолевое повреждение бронхов, легких.

Противопоказания:

• отсутствие в клинике условий для обеспечения животного дополнительным кислородом в течение нескольких часов после проведения БАЛ;

• исследование противопоказано тем животным, у которых наблюдается затруднение дыхания даже на фоне назначения им кислородотерапии;

• любые противопоказания для проведения общей анестезии.

Метод отбора биоматериала: бронхо-альвеолярный лаваж

Преаналитика:

Порядок действий:

1. Получить смывы из бронхов путем введения стерильного физиологического раствора с последующей реаспирацией жидкости (БАЛ).

2. Поместить полученный материал в 2 пробирки с сиреневой крышкой / Калий ЭДТА.

3. Осторожно перевернуть пробирки 6-7 раз для перемешивания жидкости с антикоагулянтом.

4. Одну пробирку с сиреневой крышкой центрифугировать (10-15 минут, 700 g).

5. После центрифугирования аккуратно слить надосадочную жидкость (оставив на дне пробирки 150-200 мкл), аккуратно перемешать полученный осадок пипеткой Пастера/дозатором с наконечником. Сделать 1-2 мазка из осадка на стекле так, чтобы мазок содержал область щетки (забрать около 5-10 мкл жидкости и нанести на стекло оставив отступ для макрировки при отсуствии окна для подписи, аккуратно распределить жидкость шпателем, без давления и отрыва шпателя от стекла).

6. Высушить мазки на воздухе в течение 15 минут.

7. Подписать предметные стекла (вид, кличка животного, фамилия владельца), положить в маркированный транспортный контейнер. Использованную пробирку утилизировать.

8. Заполнить все поля лицевой стороны направительного бланка. С обратной стороны описать клиническую картину, подробный анамнез или приложить выписку из истории болезни.

9. Направить в лабораторию 1 пробирку с ЭДТА (не центрифугированную ранее) + мазки на стеклах.

10. Хранение стекол до отправки   +20°С…+25°С, температурный режим транспортировки +2….+8°С (синий пакет).

Интерпретация результата: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Трахея и бронхи выстланы псевдостратифицированными, реснитчатыми эпителиальными клетками, которые обычно наблюдаются в жидкости из трахеальных, но не бронхоальвеолярных образцов. Эти клетки удлиненные с круглым, выступающим ядром и базофильной цитоплазмой с ресничками на апикальной поверхности. Реснички часто отличаются от этих клеток, если подготовка образца задерживается, и визуализируются свободно на заднем плане. Поэтому важно не путать эти реснички с бактериальными палочками. Кубовидный эпителий выстилает бронхиолы, поэтому эти клетки можно увидеть как в образцах TTW, так и в БАЛ. Бронхиолярный эпителий появляется по отдельности или пластинами. Эти клетки имеют округлую или кубическую форму, имеют умеренное количество базофильной цитоплазмы и содержат круглое, центрально расположенное ядро.

Образцы БАЛ от нормальных кошек и собак имеют низкая клеточность. Альвеолярные макрофаги являются основным типом клеток, наблюдаемым в нормальных образцах. Лейкоциты могут встречаться реже. Нейтрофилы обычно составляют менее 5–10% популяции ядросодержащих клеток. Однако сообщалось о популяциях нейтрофилов, превышающих20%. Другие типы клеток, наблюдаемые в меньших количествах, включают лимфоциты (от 5% до 14%), эозинофилы у видов, отличных от кошек (менее 5%) и тучные клетки (менее 2%). Редкие бокаловидные клетки могут наблюдаться и не считаются аномальным явлением, если их количество не увеличено значительно. Бокаловидные клетки примерно размера макрофагов, но содержат обильную цитоплазму, заполненную отличительными, глубоко базофильными, однородными гранулами.

Число эозинофилов заметно различается у собак и кошек. Менее 5% типично для образцов от собак, тогда как от 5% до 28% эозинофилов можно увидеть в образцах БАЛ от здоровых кошек. Процент эозинофилов в дыхательных путях внешне здоровых кошек чрезвычайно изменчив и, таким образом, должен интерпретироваться с осторожностью и в корреляции с клиническими признаками и другими диагностическими результатами. Эозинофилы часто упускаются из виду в образцах, потому что они могут выглядеть иначе, чем типичные эозинофилы, наблюдаемые в крови. Эозинофилы часто попадают в скопления слизи и не могут полностью распрямиться, что приводит к образованию гранул темно-красного или коричневого цвета, а не ожидаемых гранул ярко-розового или красного цвета.

Форма выдачи результата: бланк содержит описание цитологического БАЛ, оценку морфологии клеточных элементов, заключение и комментарий, в котором указываются вероятные причины того или иного состояния.

Источники:

1. Canine and Feline Cytology, A Color Atlas And Interpretation Guide, 3th Edition (Raskin, Meyer), 2016.

2. Canine and Feline Skin Cytology, 2017 (Francesco Albanese).

3. Cowell and Tyler's Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat, 4th Edition (Cowell, Tyler), 2014.