Посев мочи на микрофлору с определением чувствительности к антимикробным препаратам (основной перечень антибиотиков)

Симптомы заболеваний (мочеиспускание в неположенном месте, дизурия, гематурия, поллакиурия, странгурия), связанные с воспалением мочевыводящих путей, являются одними из самых распространенных обращений владельцев животных к ветеринарному врачу. Зачастую этиологическим фактором данных патологий, является бактериальная инфекция. Но у кошек зачастую распространена бессимптомная бактериурия. По статистике, бактериальные инфекции мочевыводящих путей (ИМП) встречаются на протяжении жизни примерно у 14% собак, с повышением распространенности среди пожилых животных, у кошек моложе 10 лет бактериальные ИМП встречаются редко, поражая только 1–8% этой популяции. Процент заболеваемости выше у пожилых кошек, и у имеющих в анамнезе хроническую болезнь почек (ХБП). Чаще всего, среди кошек отмечаются патологии, не связанные с инфекциями: идиопатический цистит, мочекаменная болезнь или поведенческие расстройства. Инфекции верхних мочевых путей менее распространены у домашних животных, но клинически важны из-за возможных последствий в виде значительного острого или хронического повреждения почек.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Микробиологическое исследование мочи является «золотым стандартом» в диагностике ИМП, так как, зачастую ветеринарным врачам приходится назначать антибактериальные препараты при многих патологиях этой системы. Неразумно назначенная терапия (некорректно выбранная группа и доза антибиотиков, кратность их применения и длительность курса лечения) может привести к ухудшению здоровья питомца, рецициву заболевания, развитию устойчивости к антимикробным препаратам и ухудшению прогноза. Успешное лечение ИМП начинается с постановки точного диагноза , что позволяет выбрать подходящий антибиотик и схему его применения, которая зависит как от вида выделенных бактерий, так и от состояния пациента, наблюдаемых у него сопутствующих патологий других систем органов. Посев мочи также проводится для контроля эффективности антибиотикотерапии, особенно у пациентов с рецидивирующими ИМП, наличием анатомических аномалий, хронических заболеваний и у пациентов с иммуносупрессией.

Образцы для посева мочи в идеале, должны быть собраны с помощью цистоцентеза, если нет противопоказаний (которые редко бывают). Ультразвуковой контроль облегчает сбор образца цистоцентезом, а также предоставляет возможность оценить мочевой пузырь на предмет аномалий, таких как уролиты, или образования, и при необходимости, взять биоптат слизистой оболочки мочевого пузыря на бакпосев. Но принимается на исследование и моча, взятая другими методами (катетеризация мочевого пузыря, естественное мочеиспускание).

В лаборатории VET UNION для микробиологического посева мочи используются питательные среды:

1. Кровяной агар (среда высоко питательная и предназначена для роста широкого спектра микроорганизмов). Посев выполняется методом центрального штриха с перпендикулярным зигзагообразным рассевом на чашку bi-plate, петлей 10 мкл;
2. Лактозо-цистиновый агар (CLED) используют для культивирования большинства бактериальных возбудителей мочевых инфекций. Посев выполняется методом центрального штриха с перпендикулярным зигзагообразным рассевом на чашку bi-plate, петлей 10 мкл;

Посевы просматриваются 4 раза в течение 48 часов (интервал 12 часов), в том числе под увеличительным стеклом (чтобы не пропустить мелкие колонии или «нежный» рост). Если в процессе термостатирования посевов, выявлялся рост, то далее действия по следующему алгоритму.

Выявленные изоляты идентифициуют посредством масс-спектрометра MALDI-TOF Biotyper до вида с целью типирования аэробных микроорганизмов, т.е. Еscherichia coli. Enterobacteriaceae spp., аэробные неферментирующие грамотрицательные бактерии (НГОБ) (в т.ч. Pseudomonas, Burkholderia spp., Acinetobacter spp., Stenotrophomonas spp.), S. schleiferi, S. aureus, S. pseudintermedius/intermedius, Str. agalactiae, Str. zooepidemicus, Str. dysgalactiae, Str. canis, Corynebacterium auricanis, Сorynebacterium jeikeium, Corynebacterium urealyticum, Enterococcus spp. Если обнаружен рост бактерий, которых нет в этом списке в титре 10*5 КОЕ\тамп. в монокультуре, проводится анализ литературы по ветеринарной микробиологии на предмет поиска информации о клинической значимости их и принимается решение дальнейшей работе с изолятом и о внесении или невнесении этого микроорганизма в список патогенов.

После типирования, и имея критерии интерпретации антибиотикочувствительности (CLSI AST), монокультура пересевается на кровяной агар для получения суточной культуры и на следующий день выполняется тест по определению чувствительности к антибиотикам.

В соответствии со стандартами CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов), жизнеспособность микроорганизмов определяется для каждой тест-культуры в конечных точках времени 24 и 48 часов. В случае отсутствия роста бактерий более 48 часов, выдается результат «роста микрофлоры не выявлено». Подобный комментарий выдается и в случае обнаружения роста микроорганизмов, не входящих в список уропатогенов, а также при выявлении уровня роста колоний бактерий ниже при получении образца мочи цистоцентезом КОЕ >= 10*1, при катетеризации мочевого пузыря КОЕ/мл 10*3 (кобели и кошки) , > 10*5 (суки), при получении образца мочи при естественном мочеиспускании – любое количество возбудителя может являться контаминацией и не будет доказательством бактериальной инфекции МВП.

Показания:

• определение микроорганизма, вызвавшего инфекцию мочевыделительной системы (острые и хронические рецидивирующие циститы, нефриты и пр.) и контроль качества антибиотикотерапии.

Противопоказания: не известны

Подготовка пациента: при сборе пробы путем естественного мочеиспускания, необходим туалет наружных половых органов.

Метод отбора: цистоцентез, катетеризация мочевого пузыря, естественное мочеиспускание.

Преаналитика:

Общие рекомендации:

1. Отбор пробы для микробиологического исследования рекомендуется осуществлять до начала лечения антимикробными препаратами (АМП), антисептиками, противогрибковыми препаратами.
2. Необходимо использовать транспортные среды, предоставляемые лабораторией VET UNION.
3. Важно правильно хранить предоставленные транспортные среды (согласно рекомендациям производителя на этикетке флаконов). При хранении в холодильнике необходимо предварительно согреть до комнатной температуры перед использованием (в течение примерно 30 минут).
4. Правильно выбрать транспортную среду для каждого вида исследования (согласно описанию теста).
5. Обязательно маркировать флакон с транспортной средой, заполнять все графы направительного бланка с указанием времени и даты взятия биоматериала.
6. Соблюдать сроки и режим хранения проб, полученных для исследования (подробная информация в описании теста).

Неприемлемые условия для исследования:

• непригодна моча, хранившаяся более 48 часов;
• непригодна для исследования моча, собранная в неправильную транспортную среду (например, гелевая среда Amies (Эймс), среда Cary Blair (Кери Блэр));
• не принимается на исследование моча, собранная в пустой контейнер (например, шприц, пробирка).

Порядок действий:

1. В лабораторию поступает пробирка с желтой крышкой /зеленой крышкой с борной кислотой.

2. Собрать мочу(около 50 мл) в контейнер для сбора со встроенным устройством для переноса мочи.

3. Снять защитную наклейку с крышки контейнера, насадить пробирку вниз резиновой пробкой в углубление на крышке контейнера.

4. Наполнить пробирку мочой. После того как моча прекратит поступать в пробирку, снять пробирку с пробойника.

5. Минимальный объем мочи, необходимый для переноса из контейнера в пробирку при помощи вакуума, – 20 мл.

6. При меньшем объеме, для переноса 4 мл мочи использовать стерильный шприц.

7. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.

8. Заполнить направительный бланк, указав код клиента время и способ взятия мочи.

ВНИМАНИЕ! Минимальный объем мочи 4 мл, строго по метку на пробирке!

Хранение и транспортировка: Для транспортировки используется пробирка BD Vacutainer® C&S для микробиологического анализа мочи.

Данная транспортная пробирка позволяет сохранить биоматериал в неизмененном виде до 48 часов  при температуре хранения +2°С...+8°С. Выдается лабораторией VET UNION. 

Единицы измерения: КОЕ/мл.

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

При взятии мочи цистоцентезом – у здоровых животных должна быть стерильна. При взятии мочи естественным путем – интерпретация затруднительна вследствие контаминации мочи бактериями из дистальной части уретры, препуция, преддверия влагалища, с кожи наружных половых органов и шерсти. В данном случае патологический титр возбудителя, возможно, следует рассматривать более 10*4 КОЕ/мл.

Форма выдачи результата: наличие/отсутствие роста микроорганизмов, наименование возбудителя, степень бактериурии, выраженная в КОЕ/мл. и чувствительность к антимикробным препаратам.

Список источников:

1. Urinary tract infection and subclinical bacteriuria in cats: A clinical update. Roswitha Dorsch, Svenja Teichmann-Knorrn, Heidi Sjetne Lund. PMID: 31601143 PMCID: PMC6826873 DOI: 10.1177/1098612X19880435;
2. The Veterinary Journal 247 (2019) 8–25/ International Society for Companion Animal Infectious Diseases (ISCAID) guidelines for the diagnosis and management of bacterial urinary tract infections in dogs and cats. J. Scott Weesea, Joseph Blondeaub,c, Dawn Boothed, Luca G. Guardabassie,f, Nigel Gumleyg, Mark Papichh, Lisbeth Rem Jesseni, Michael Lappinj, Shelley Rankink,Jodi L. Westroppl, Jane Sykesl;
3. The Veterinary Journal 190 (2011) 22–27/ Canine bacterial urinary tract infections: New developments in old pathogens/ Mary F. Thompson , Annette L. Litster , Joanne L. Platell , Darren J. Trott.