Боррелиоз (болезнь Лайма) (Borrelia burgdorferi sensu lato) (ПЦР)

Клещевой боррелиоз, или болезнь Лайма представляет собой трансмиссивное заболевание, вызываемое спирохетами Borrelia burgdorferi sensu lato, распространенное в Северной Америке, Европе и Азии. Болезнь поражает широкий круг видов млекопитающих, включая собак, и в настоящее время является самой распространенной трансмиссивной болезнью человека в США и Европе. Возможны инфицирование и сероконверсия у кошек, однако развития заболевания обычно не происходит.

Borrelia burgdorferi sensu lato представляет собой группу, в которую входят более 15 геновидов боррелий, некоторые из них не являются патогенными.

Боррелии не способны выживать в окружающей среде, поэтому они передаются между резервуарными хозяевами (млекопитающими, птицами и ящерицами) и переносчиками — кровососущими членистоногими. B. burgdorferi sensu lato передается клещами комплекса Ixodes ricinus-persulcatus, географическое распространение болезни Лайма соответствует ареалу клещей-переносчиков, а также животных-резервуаров инфекции.

В Европе наиболее значимыми резервуарными хозяевами боррелий являются мелкие грызуны, такие как белки, а также птицы, например, черные и певчие дрозды.

Было проведено полное секвенирование генома B. burgdorferi. На разных стадиях инфекции микроорганизм экспрессирует различные поверхностные липопротеины, что позволяет ему адаптироваться к различным условиям существования в организме членистоногих-переносчиков и млекопитающих-хозяев. Это свойство боррелий используется при разработке методов диагностики инфекции и вакцин против боррелиоза. Наиболее важными поверхностными протеинами являются OspA, OspC и VlsE. В течение осени, зимы и весны боррелии пребывают в состоянии покоя в нимфах клещей-переносчиков и экспрессируют протеин OspA, который позволяет им прикрепляться к поверхности средней кишки нимф. Когда клещ поглощает кровь млекопитающих поздней весной и летом, экспрессия OspA подавляется, и начинается экспрессия протеина OspC. После этого боррелии проникают в гемолимфу и слюнные железы клеща. OspC связывается с протеином слюнной железы клеща, что позволяет микроорганизму избежать действия факторов иммунного ответа хозяина. OspC также связывается с плазминогеном млекопитающих, что способствует распространению боррелий в организме хозяина-млекопитающего. При воздействии неблагоприятных факторов, таких как антибиотики, нутриентная депривация и изменения pH, в организме хозяина B. burgdorferi может принимать сферическую форму.

Считается, что для передачи инфекции клещ должен находиться в прикрепленном состоянии на животном-хозяине в течение минимум 24 часов, однако в некоторых случаях передача возможна и в течение более короткого времени. Боррелии размножаются в месте прикрепления клеща и распространяются по организму хозяина. Хотя в течение короткого времени боррелии могут быть обнаружены в крови, основным их местом размножения и распространения является, прежде всего, соединительная ткань. После инфицирования микроорганизмы могут находиться в организме собаки более одного года благодаря механизмам, позволяющим избегать действия факторов иммунного ответа.

В отличие от человека, болезнь Лайма у собак не сопровождается появлением сыпи на ранних стадиях течения заболевания. Примерно у 10% инфицированных собак наблюдаются выраженные клинические симптомы. Первые клинические проявления возникают у собак через 2-5 месяцев после укуса клеща и включают лихорадку различной степени выраженности, отсутствие аппетита, тромбоцитопению и хромоту, вызванную полиартритом.

У собак, инфицированных B. burgdorferi, может наблюдаться мембранопролиферативный гломерулонефрит, который чаще всего встречается у золотистых лабрадоров и лабрадоров-ретриверов. Предполагается, что в патогенезе нефрита при болезни Лайма играют роль иммунные механизмы, поскольку ДНК или антигены боррелий в биоптатах почки больных собак обычно не обнаруживаются. Клинические проявления, вызванные протеинурией и почечной недостаточностью, включают отсутствие аппетита, летаргию, снижение массы тела, рвоту, полиурию и полидипсию.

У собак с артритом при болезни Лайма наблюдаются летаргия, лихорадка, хромота, отеки и болезненность суставов, а также слабо выраженная генерализованная периферическая лимфаденопатия.

Сложность диагностики болезни Лайма является общеизвестной. У подавляющего большинства инфицированных собак болезнь протекает в субклинической форме, после чего антитела могут обнаруживаться у них в течение нескольких месяцев или лет. Диагноз должен ставится на основании клинических симптомов, данных анамнеза (проживание или временное нахождение в эндемичном регионе, даже при отсутствии информации об укусах клещей), обнаружения антител к B. burgdorferi и результатов исследования методом ПЦР. Метод ПЦР считается оптимальным для обнаружения микроорганизма. Метод ПЦР не позволяет дифференцировать живых, мертвых или нежизнеспособных боррелий.

Преаналитика:

1. Провести процедуру взятия синовии.

2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.    

7. Сохранность образца при -17°С…-23°С 1 месяц.

8. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ СИНОВИИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ 

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Метод ПЦР для обнаружения боррелиоза обладает рядом особенностей, которые ограничивают его использование. Точность исследования с помощью данного метода может зависеть от выбора праймеров, подготовки образцов, а также используемых методов экстракции.