Лейшманиоз (Leishmania spp.)

Лейшманиоз – инфекционная болезнь, вызываемая простейшими рода Leishmania. Лейшмании существуют в двух морфологических формах – промастиготы и амастиготы.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Промастиготы, или истинные внеклеточные формы жгутиковых, наблюдаются у москитов, в то время как собаки являются носителями только внутриклеточных и не жгутиковых паразитов, называемых амастиготами. Амастиготы обнаруживаются внутри паразитофорной вакуоли паразитированных макрофагов. Амастиготы имеют овальную форму размером 3-4 × 2 мкм и содержат большое ядро и стержневидный элемент – кинетопласт. Амастиготы переживают фагоцитоз, а затем окислительный стресс в макрофагах. Они размножаются продольным двойным делением.

Leishmania может быть обнаружена во внеклеточном положении, когда макрофаги лизируются или изменяются при методе отбора, окрашивании. Зараженные макрофаги увеличиваются в размерах и имеют вид ежевики.

В основном Лейшмании поражают грызунов, собак и людей. Есть зарегистрированные случаи заражения лошадей, кошек, даманов, опоссумов, ленивцев и некоторых других позвоночных.

Жизненный цикл Leishmania протекает со сменой хозяев: позвоночного животного или человека и переносчика – москита. Самки москитов-гематофагов глотают амастиготы во время укуса зараженного животного, после чего амастиготы перемещаются в кишечник насекомого, где начинают развиваться. Через 15-20 дней, в зависимости от температуры в слюнных железах насекомых можно обнаружить промастиготы, являющиеся дальнейшей инвазионной формой для позвоночных. После укуса зараженного комара здорового животного, промастигот вступает в контакт с макрофагами и подвергаться фагоцитозу. Затем они начинают размножаться и передаются от одного макрофага к другому посредством фагоцитоза, таким образом распространяясь по всему организму.

Патогенез Лейшманиоза связан с инфильтрацией всех тканей и органов линиями макрофагальных клеток, которые вызывают функциональные нарушения и разрушают ткани. Синтез цитокинов, ответственных за многие эффекты, такие как IFN, IL-1 и TNF, помогают объяснить многие из этих нарушений. Лейшманиоз считается преимущественно иммунологическим заболеванием. Выжившая внутри макрофагов Leishmania, подавляет их активность и регулирует иммунный ответ хозяина так, чтобы система макрофагов фагоцитов не активировалась: стимуляция ответа типа Th2 (гуморальный) в ущерб ответу типа Th1 (клеточный). L. infantum обладает дермотропным и висцеротропным действием у собак. Патогенность связана с инфицированием клеток, которые являются частью иммунной системы, что вызывает иммунопатологическое заболевание. Лейшмании, как и многие паразиты, имеют сложную антигенную структуру, включая поверхностные антигены (липофосфогликан, поверхностный гликопротеин и соматические антигены). Антигенное покрытие различается у инфекционных промастигот и амастигот, что является механизмом избегания иммунного распознавания.

Инкубационный период заболевания от 3-12 месяцев.

Лейшманиоз встречается во многих странах Америки, Средиземноморского бассейна, Ближнего Востока и Центральной Азии. В некоторых странах Европы распространенность заболевания колеблется от 10-60% (Юг Франции, Испании, Италии, Греция). В Российской Федерации выявленные случаи Лейшманиоза являются завозными.

Лейшманиоз клинически очень полиморфен, вызывая множество клинических признаков, как общих, так и кожных. К самым распространенным симптомам относят апатию (вплоть до оцепенения), снижение аппетита, амиотрофию (особенно височной и челюстной области), снижение массы тела, непостоянную гипертермию, диффузную алопецию, выпадение шерсти на конечностях и голове, вокруг глаз, ушей, хвоста, постоянно и быстро растущие когти (онихогрифоз), кератогенные нарушения, образование язв на коже, слизистых оболочках, подушечках лап, образование подкожных узелков.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: ПЦР real-time.

Показания: дифференциальная диагностика:

• Дерматозов (демодекоз, пиодерматит и тд.).
• Системной красной волчанки.
• Других, заболеваний, схожих по клиническим проявлениям с Лейшманиозом.

Противопоказания: согласно протоколу оценки степеней риска для пациента (противопоказания к общей анестезии, непереносимость препаратов для местного обезболивания и тд.).

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения системных лекарственных препаратов, которые могут повлиять на результат.

Метод отбора: пункция костного мозга.

Преаналитика: 

1. Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).

2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.    

7. Сохранность образца при -17°С…-23°С 2 недели.

8. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ 

Интерпретация результата:

Результаты исследования содержат информацию для ветеринарных специалистов. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Диапазоном нормальных значений считается отрицательный результат.

Форма выдачи результата: качественный, с указанием наличия/отсутствия ДНК возбудителя.

Список источников:

1. «Textbook of Clinical Parasitology in dogs and cats», Frédéric Beugnet, Lénaïg Halos and Jacques Guillot, Copyright © 2018.
2. «Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.» Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф.Смит, Л.Тиллей, «Аквариум» 2013 г.
3. «Ветеринарная паразитология» Форейт Уильям Дж.; Практика ветеринарного врача «Аквариум-Принт», 2015 г.