Вирус лейкемии (FeLV, количественное обнаружение вирусной РНК)

Вирусная лейкемия кошек вызывается FeLV (Feline Leukemia Virus) – оболочечным РНК-содержащим вирусом рода Gammaretrovirus, принадлежащим семейству Retroviridae. Инфекция FeLV является одной из ведущих причин смерти кошек, вызывая иммуносупрессию, патологии костного мозга и развитие опухолей гематопоэтической ткани. Инфекция FeLV прогрессирует быстрее, чем FIV, и является более патогенной, поэтому кошки с прогрессирующими инфекциями обычно погибают вследствие осложнений. В отличие от FIV, у многих кошек на ранней стадии инфекции FeLV наблюдается регресс до начальной стадии латентного вирусоносительства («регрессирующая инфекция»).

Передача FeLV-A происходит преимущественно при контакте со слюной больного животного, например, при вылизывании, груминге и совместном использовании мисок для корма и воды. Также возможна передача при укусах (в том числе блошиных), переливании крови от больных животных, с молоком. Вирус неустойчив к действию факторов внешней среды и быстро инактивируется дезинфектантами, мылом и при высушивании. Общая распространенность инфекции FeLV снизилась за последнее время благодаря широкому внедрению в практику специальных методов исследования и вакцинации. Риск развития инфекции повышен у животных, имеющих доступ на улицу, контактирующих с другими кошками, интактных котов, отличающихся агрессивностью, а также кошек с коинфекцией FIV. Возможна вертикальная передача вируса от матери потомству.

Болезнь чаще отмечается у взрослых кошек, чем у молодых животных в возрасте до шести месяцев. Средний возраст инфицированных животных составляет три года, что меньше, чем для FIV. Варианты исхода инфекции FeLV могут быть разнообразными и зависят от штамма и дозы вируса, путей передачи инфекции, факторов, влияющих на функцию иммунной системы хозяина (возраста, генетики, наличия коинфекций, стресса, применения иммуносупрессивных препаратов).

Вирус проникает в организм ороназальным путем, репликация происходит в лимфоидной ткани ротоглотки, миндалинах и локальных лимфоузлах. Из места первичной репликации вирус распространяется по организму в инфицированных лимфоцитах и моноцитах (первичная виремия). В этот период у некоторых кошек могут развиваться симптомы системной патологии, такие как лихорадка, летаргия и/или лимфаденопатия. Репликация в костном мозге, в ходе которой также заражаются нейтрофилы и предшественники тромфоцитов, приводит к вторичной виремии и системной инфекции. Поражение костного мозга считается критическим этапом патогенеза инфекции FeLV. После инфицирования эпителиальных клеток слюнных желез вирус в больших количествах выводится со слюной; небольшие количества вируса могут выводиться с мочой и фекалиями.

Прогрессивная инфекция развивается при вовлечении в процесс костного мозга, в ходе чего гранулоциты, тромбоциты, а также лимфоциты и моноциты в периферической крови оказываются инфицированы вирусом. Такая форма инфекции характеризуется персистирующей виремией/антигенемией на фоне отсутствия эффективного специфического иммунного ответа. Идентификация таких животных – наиболее важная задача как с клинической, так и с эпидемиологической точки зрения. Кошки выделяют большое количество вирусных частиц и представляют большой риск заражения других животных. Для подтверждения прогрессивной инфекции нужна серия тестов с интервалом от нескольких недель до месяцев для обнаружения антигена вируса лейкоза р27. У таких животных положительными будут результаты ПЦР-исследований на провирусную ДНК и вирусную РНК. Иногда статус прогрессивной инфекции устанавливается в течение нескольких недель после заражения, в ходе которых результаты обнаружения антигена вируса и вирусная нагрузка могут быть непостоянными. Прогноз для этой стадии часто неблагоприятный, и животные погибают от ассоциированных с вирусом лейкоза заболеваний, хотя при должном контроле могут жить довольно долго. Животные, демонстрирующие изначально высокую вирусную нагрузку, в большинстве случаев имеют прогрессирующую форму инфекции, и количество вируса в крови у них не снижается в течении длительного времени. Отдельные животные с прогрессирующей инфекцией могут иметь низкую вирусную нагрузку, которая сохраняется на протяжении всей жизни.

Регрессивная форма инфекции наблюдается в случаях, когда животные развивают достаточно эффективный противовирусный иммунный ответ и освобождаются от виремии. У большинства инфицированных кошек не происходит заражения костного мозга, и вирус сохраняется преимущественно в лимфоцитах и моноцитах в форме провирусной ДНК. При этом вирусная РНК в крови либо не обнаруживается (регрессировавшая инфекция), либо изначально присутствует, но со временем исчезает. Прекращение антигенемии происходит обычно в течение от 1 до 12 недель, в некоторых случаях дольше. Вероятность освобождения от виремии зависит от баланса между иммунной системой кошки и вирусом, и на исход влияют различные факторы, включая возраст, сопутствующие стрессовые факторы и инфекции, особенности конкретного изолята вируса лейкоза. Для подтверждения статуса регрессивной инфекции также требуется серия исследований на вирусный антиген и/или РНК в крови после первичного положительного результата. Как правило, животные с регрессирующей инфекцией изначально имеют низкие или пограничные значения вирусной нагрузки, которые снижается до отрицательного результата в течении 1-13 недель, редко до одного года. Животные с регрессивной инфекцией обычно не страдают от лейкоз-ассоциированных заболеваний, хотя у них могут развиться лимфома или подавление функции костного мозга.

Вирус лейкоза при регрессивной инфекции способен к активизации под влиянием иммуносупрессии различного генеза, но его потенциал реактивации сокращается с увеличением времени, прошедшего с заражения. Кошки с регрессивной инфекцией могут быть РНК-положительными, и в этом случае риск активации вируса выше, чему РНК-отрицательных животных.

Абортивная форма инфекции характерна для животных, которые справились с вирусом лейкоза до момента его интеграции в ДНК клеток. Все прямые методы детекции вируса у таких животных дают отрицательный результат, и единственным указанием на контакт с вирусом являются специфические антитела.

Фокальная, локализованная или атипичная инфекция характеризуется присутствием в крови вирусного антигена р27, но не инфекционного вируса. Причиной этого является сохранение вируса секвестрированным в определенных тканях (лимфоузел, селезенка) под контролем иммунной системы хозяина. При этом продукция и высвобождение вирусного антигена в кровь может быть непостоянным, а инфицированные провирусом клетки либо отсутствуют, либо присутствуют в минимальном количестве. Нет точных данных, насколько распространена такая форма инфекции, т.к. результаты лабораторных исследований противоречивы.

Спустя небольшое время после заражения вирусная нагрузка (количество провирусной ДНК или вирусной РНК в крови) не имеет существенных различий между кошками с разными исходами инфекции, т.е., прогрессивной и регрессивной формами, поэтому количественная ПЦР в этот временной отрезок не дает полезной информации. Однако, спустя несколько недель у животных с регрессивной инфекцией количество вирусной РНК будет ниже, чем в случае прогрессивной инфекции. Поэтому, как только инфекция вирусом лейкоза была подтверждена, определение вирусной нагрузки в крови может быть полезным инструментом для диагностики и прогнозирования формы инфекции. Так как обычно невозможно установить точное время заражения и стадию инфекции у животного в полевых условиях, то однократного ПЦР-исследования часто бывает недостаточно, и тестирование следует повторять спустя 4-12 недель.

В зависимости от количества вирусных частиц в крови животного, выделяют две степени вирусной нагрузки:

низкая – 1,2*10² – 9,9*10⁵ копий/мл;

высокая – 1,0*10⁶ и более копий/мл; обычно соответствует прогрессирующей инфекции, регрессия и снижение вирусной нагрузки маловероятны.

Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов)*

Исследуемый материал: замороженная сыворотка крови

Метод исследования: ПЦР Real-time

Показания: диагностика инфекции

Противопоказания: неизвестны

Подготовка пациента: не требуется

Метод отбора: венепункция

Преаналитика:

1.      Прием биоматериала в лабораторию – пробирка с красной крышкой с гелем (замороженная сыворотка крови);

2.      Взятие крови – пробирка с красной крышкой с гелем, 2.5 мл.

3.      Осторожно перевернуть пробирку 4-6 раз.

4.      Пробирку оставить в вертикальном положении на 30 минут при комнатной температуре.

5.      Центрифугировать при 3300 об/мин. 10 мин, не позднее 60 минут после взятия.

6.      Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Температурный режим транспортировки биоматериала в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

ВНИМАНИЕ! Минимальный объем крови для выполнения исследования - 2,5 мл.

Интерпретация: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: Результат исследования на РНК FeLV выдается с формулировкой «обнаружено n копий РНК/мл», где n – количество.

Список источников:

1.     Hofmann-Lehmann R. and Hartman K. Practical approach to FeLV diagnosis. Journal of Feline Medicine and Surgery (2020) 22, 831–846

1. Andrea N. Torresa, Kevin P. O’Hallorana, Laurie J. Larsonb, Ronald D. Schultzb, and Edward
2. A. Hoovera. Development and application of a quantitative real-time PCR assay to detect feline leukemia virus RNA. Vet Immunol Immunopathol. 2008 May 15
3. Levy, J.K.; Scott, H.M.; Lachtara, J.L.; Crawford, P.C. Seroprevalence of feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus infection among cats in North Аmerica and risk factors for seropositivity. J Am Vet Med Assoc 2006, 228, 371-376.
4. Hoover, E.A.; Mullins, J.I. Feline leukemia-virus infection and diseases. Journal of the American Veterinary Medical Association 1991, 199, 1287-1297.
5. Gleich, S.; Hartmann, K. Hematology and serum biochemistry of feline immunodeficiency virus-infected and feline leukemia virus-infected cats. J Vet Intern Med 2009, 23, 552-558.
6. Addie, D.D.; Dennis, J.M.; Toth, S.; Callanan, J.J.; Reid, S.; Jarrett, O. Long-term impact on a closed household of pet cats of natural infection with feline coronavirus, feline leukaemia virus and feline immunodeficiency virus. Vet Rec 2000, 146, 419-424.
7. Cotter, S.M. Feline viral neoplasia. In Infectious diseases of the dog and cat, 2nd ed.; Greene, C.E. Ed. WB Saunders: Philadelphia, 1998.