Вирус лейкемии (FeLV, обнаружение вирусной РНК и провирусной ДНК одновременно)

Вирусная лейкемия кошек вызывается FeLV (Feline Leukemia Virus) – оболочечным РНК-содержащим вирусом рода Gammaretrovirus, принадлежащим семейству Retroviridae. Инфекция FeLV является одной из ведущих причин смерти кошек, вызывая иммуносупрессию, патологии костного мозга и развитие опухолей гематопоэтической ткани. Инфекция FeLV прогрессирует быстрее, чем FIV, и является более патогенной, поэтому кошки с прогрессирующими инфекциями обычно погибают вследствие осложнений. В отличие от FIV, у многих кошек на ранней стадии инфекции FeLV наблюдается регресс до начальной стадии латентного вирусоносительства («регрессирующая инфекция»).

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Передача FeLV-A происходит преимущественно при контакте со слюной больного животного, например, при вылизывании, груминге и совместном использовании мисок для корма и воды. Также возможна передача при укусах (в том числе блошиных), переливании крови от больных животных, с молоком. Вирус неустойчив к действию факторов внешней среды и быстро инактивируется дезинфектантами, мылом и при высушивании. Общая распространенность инфекции FeLV снизилась за последнее время благодаря широкому внедрению в практику специальных методов исследования и вакцинации. Риск развития инфекции повышен у животных, имеющих доступ на улицу, контактирующих с другими кошками, интактных котов, отличающихся агрессивностью, а также кошек с коинфекцией FIV.

Болезнь чаще отмечается у взрослых кошек, чем у молодых животных в возрасте до шести месяцев. Средний возраст инфицированных животных составляет три года, что меньше, чем для FIV. Варианты исхода инфекции FeLV могут быть разнообразными и зависят от штамма и дозы вируса, путей передачи инфекции, факторов, влияющих на функцию иммунной системы хозяина (возраста, генетики, наличия коинфекций, стресса, применения иммуносупрессивных препаратов).

Вирус проникает в организм ороназальным путем, репликация происходит в лимфоидной ткани ротовой полости, поражая моноциты и лимфоциты. Затем инфекционный агент попадает в циркуляторное русло. В этот период у некоторых кошек могут развиваться симптомы системной патологии, такие как лихорадка, летаргия и/или лимфаденопатия. Небольшое число пораженных лимфоцитов проникает в костный мозг, где вирус быстро поражает делящиеся клетки-предшественницы гемопоэза, а затем – лимфоидные и эпителиальные клетки различных органов. Поражение костного мозга считается критическим этапом патогенеза инфекции FeLV. После инфицирования эпителиальных клеток слюнных желез вирус в больших количествах выводится со слюной; небольшие количества вируса могут выводиться с мочой и фекалиями.

У некоторых кошек репликация вируса подавляется иммунной системой в течение нескольких недель после инфицирования, затем происходит поражение костного мозга. У таких животных развивается регрессирующая инфекция, при которой провирусная ДНК обнаруживается в геноме клеток хозяина, но размножения и выделения вируса не происходит. Развитие регрессирующей инфекции возможно после периода виремии, также допустимо отсутствие вирусемии. Регрессирующая инфекция может персистировать в течение всей жизни животного и активироваться при иммуносупрессии, например, в период беременности или при использовании иммуносупрессивных препаратов. Впоследствии у некоторых кошек с регрессирующей инфекцией могут развиться FeLV-негативные новообразования. При абортивной инфекции виремия не наблюдается, вирус не обнаруживается лабораторными методами. Инфицирование кошек абортивной инфекцией происходит небольшими дозами вируса, поэтому, несмотря на отсутствие виремии, у них отмечается наличие антител к вирусу. Развитие прогрессирующей инфекции у животных происходит после включения в патологический процесс костного мозга, а интенсивность разрушения клеток инфекционным агентом ограничивает способность иммунной системы хозяина подавлять репликацию вируса.

Исследуемый аналит: венозная цельная кровь, замороженная сыворотка крови

Метод исследования: РТ- ПЦР

Подготовка пациента: не требуется

Показания:

• заболевшие животные, особенно с анемией, гипертермией, лимфаденитом, лимфомой, поражением костного мозга или полиартритом;
• после потенциально возможного заражения анализ проводится, как минимум, через 1 месяц после контакта;
• перед вакцинацией кошки против ВЛК или перед возвращением животного домой после дачного сезона, также подобранных с улицы.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика:

Порядок действий для теста на обнаружение вирусной РНК:

1. Взятие крови – пробирка с красной крышкой, с ГЕЛЕМ.
2. Осторожно перевернуть пробирку 4-6 раз. 
   
3. Пробирку оставить в вертикальном положении на 30 минут при комнатной температуре.
   
4. Центрифугировать  при 2000 g. 10 мин.
   
5. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного,  заполнить направительный бланк, указав код клиента.
   
6. Заморозить на геле в вертикальном положении при  -17... -23°С.
   
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

Порядок действий для теста на обнаружение провирусной ДНК:

1. Провести процедуру взятия крови.
2. После внесения биоматериала в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА) осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
3. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.
5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
6. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

Интерпретация результата: 

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе провирусной ДНК/вирусной РНК вируса лейкемии кошек одновременно.

Использованная литература:

1. O'Connor, T.P. Jr.; Tonelli, Q.J.; Scarlett, J.M. Report of the national felv/fiv awareness project. J. Am. Vet. Med. Assoc. 1991, 199, 1348-1353.
2. Levy, J.K.; Scott, H.M.; Lachtara, J.L.; Crawford, P.C. Seroprevalence of feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus infection among cats in north america and risk factors for seropositivity. J Am Vet Med Assoc 2006, 228, 371-376.
3. Hoover, E.A.; Mullins, J.I. Feline leukemia-virus infection and diseases. Journal of the American Veterinary Medical Association 1991, 199, 1287-1297.
4. Gleich, S.; Hartmann, K. Hematology and serum biochemistry of feline immunodeficiency virus-infected and feline leukemia virus-infected cats. J Vet Intern Med 2009, 23, 552-558.
5. Addie, D.D.; Dennis, J.M.; Toth, S.; Callanan, J.J.; Reid, S.; Jarrett, O. Long-term impact on a closed household of pet cats of natural infection with feline coronavirus, feline leukaemia virus and feline immunodeficiency virus. Vet Rec 2000, 146, 419-424.
6. Cotter, S.M. Feline viral neoplasia. In Infectious diseases of the dog and cat, 2nd ed.; Greene, C.E. Ed. WB Saunders: Philadelphia, 1998.