Парагрипп собак (Canine parainfluenza virus) (ПЦР)

Респираторные вирусные инфекции собак часто встречаются при скученном содержании большого числа собак в помещениях, например, в приютах и питомниках. Чем выше продолжительность содержания собак в таких условиях, тем выше вероятность развития респираторной инфекции. В условиях питомников инфекционное респираторное заболевание собак (также называемое комплексом респираторных инфекций собак (КРИС), ранее называвшееся «питомниковый кашель» или «инфекционный трахеобронхит собак», может быть причиной значительных расходов, связанных с лечением и карантинированием животных. Данное заболевание может развиваться у собак, принадлежащих частным владельцам, при контакте с другими собаками на выгульных площадках, выставках или курсах дрессировки, а также в ветеринарных госпиталях.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

В связи с широким распространением в клинической практике методов молекулярной диагностики было установлено, что число вирусов, вызывающих инфекции респираторного тракта у собак, значительно выше, чем считалось ранее. Часто встречаются коинфекции, вызываемые несколькими вирусами, а также бактериями, например, Mycoplasma spp., Bordetella bronchiseptica, и Streptococcus equi zooepidemicus, которые характеризуются более тяжелым течением.

Вирус парагриппа собак (CPIV) является одной из наиболее распространенных патогенов, вызывающих КРИС у собак по всему миру. Этот оболочечный вирус, принадлежащий к семейству Paramyxoviridae, имеет одноцепочечную РНК. В отличие от вируса чумы плотоядных, внешняя оболочка вируса парагриппа содержит не только гемагглютинин, но и нейраминидазу. Риск инфекции у собак находится в прямой зависимости от плотности популяции собак. В исследованиях с экспериментальной инфекцией было показано, что репликация CPIV происходит преимущественно в слизистой оболочке носовой полости, глотки, трахеи и бронхов и вызывает повреждение респираторного эпителия. Виремия наблюдается редко, однако CPIV может обнаруживаться в селезенке, печени и почках у собак с сочетанными инфекциями. Выделение вируса наблюдается лишь в течение 8-10 дней после инфицирования, при этом респираторные секреты в форме аэрозоля обеспечивают передачу вируса восприимчивым собакам. Инфекция парагриппа собак характеризуется кашлем, иногда сопровождающимся пронзительным «трубным» звуком, который, очевидно, вызывается отеком голосовых складок. При ларингите и трахеите могут наблюдаться рвотные движения и отхаркивание мокроты. Иногда наблюдаются выраженные выделения из носа, тонзилит и фарингит. При отсутствии вторичных инфекций клинические симптомы исчезают в течение 6-14 дней. Однако, при наличии коинфекции B. bronchiseptica или иной респираторной вирусной инфекции, особенно у щенков, болезнь может протекать в тяжелой, продолжительной форме.

Клиническая картина не позволяет установить причину инфекционного респираторного заболевания, ввиду того, что различные патогены могут вызывать сходные симптомы. Частая встречаемость коинфекций также осложняет диагностику. Кроме того, неинфекционные этиологические факторы могут быть причиной развития клинической картины, напоминающей инфекционное респираторное заболевание. У большинства собак наблюдается спонтанное излечение. Если заболевание протекает в течение более 7-10 дней, либо при наличии бактериальной пневмонии, сопровождающейся летаргией и отсутствием аппетита, необходима постановка этиологического диагноза. В случае вспышки заболевания в питомнике, для повышения точности диагноза, а также для более корректной интерпретации клинической значимости результатов исследований, рекомендуется получение нескольких типов образцов от нескольких собак, у которых наблюдаются или отсутствуют клинические симптомы. На ранней стадии болезни (в течение первых 1-3 дней), или у инфицированных собак в период до появления клинических симптомов, наиболее эффективны методы обнаружения возбудителя, такие как ПЦР. Комбинированное применение различных методов обнаружения возбудителя и серологических методов исследования позволяет повысить точность диагноза. Патологоанатомическое исследование позволяет получить ценную диагностическую информацию, и должно проводиться в случаях гибели животных или после проведения эвтаназии. Полученные образцы тканей направляются на гистопатологическое исследование (после фиксации в формалине), бактериологический и вирусологический посев (свежие образцы ткани) и исследование ПЦР для обнаружения вирусов и бактерий – возбудителей респираторных заболеваний (свежие или замороженные образцы ткани).

Учитывая то, что комплекс респираторных инфекций собак является полиэтиологической патологией, проводимые исследования обычно направлены на выявление рада патогненов, в том числе обнаружения вируса парагриппа (C.parainfluenzs virus) методом ПЦР. Тест-системы ПЦР, используемые дополнительно в таких случаях, позволяют обнаруживать различные респираторные патогены, такие как респираторный аденовирус, респираторный коронавирус, вирус гриппа собак, а также бактериальные патогены, такие как B. bronchiseptica и Mycoplasma spp. При этом используются мазки из носовой полости и/или каудальной части глотки, или смывы.

Исследуемый аналит: аспират, полученный в результате бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ).

Метод исследования: ПЦР в режиме реального времени.

Показания: взятие образца у животных во время бронхоскопии, а также для диагностики в тех случаях, когда у животного наблюдается кашель, затрудненное дыхание, выявляются патологические изменения в легких при рентгенографическом исследовании или другие признаки заболевания респираторного тракта.

• При необходимости получения образцов у животных с признаками таких респираторных заболеваний, при которых результат других, менее инвазивных процедур (соскоб эпителиальных клеток из носовой полости), оказался не информативен.

Противопоказания:

• отсутствие в клинике условий для обеспечения животного дополнительным кислородом в течение нескольких часов после проведения БАЛ;
• исследование противопоказано тем животным, у которых наблюдается затруднение дыхания даже на фоне назначения им кислородотерапии;
• любые противопоказания для проведения общей анестезии.

Подготовка пациента:

• Утром перед исследованием животное не кормить. Так как процедура бронхо-альвеолярного лаважа проводится под общей седацией, пациента необходимо подготовить, в соответствии с соблюдением всех требований, в зависимости от группы анестезиологического риска.
• Биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов.
• Техника взятия должна проводиться с соблюдением правил асептики/антисептики для минимизирования возможной контаминации из верхних дыхательных путей.

Метод отбора:

Бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ) – это метод получения образца жидкости с диагностической целью из мелких дыхательных путей – альвеол и в некоторых случаях из интерстициальных тканей. Лаваж (смыв) обычно выполняют во время бронхоскопии, что позволяет провести визуальный осмотр дыхательных путей и осуществить прицельный смыв с определенных долей легких. Кроме того, БАЛ можно выполнять и без бронхоскопа. Стерильный физиологический раствор вводят в легкие в достаточном объеме, чтобы он заполнил альвеолы. Затем раствор вместе с клетками и жидкостью с эпителиальной выстилки легких аспирируют обратно.

Преаналитика:

1. провести процедуру взятия бронхоальвеолярного лаважа;
2. перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА;
3. после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
4. заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
5. пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
6. заполнить направительный бланк, указав код клиента;
7. cохранность образца при  -17°С…-23°С 2 недели.

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ БАЛ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация результата:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Формат выдачи результата: качественный тест. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе РНК вируса парагриппа (СPiV).

Список источников:

1. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф.Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.
2. Infectious Dieseases of the dog and cat, fourth edition ISBN: 978-1-4160-6130-4 Copyright © 2012, 2006, 1998, 1990 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.