Диагностика коронавируса у кошек (ПЦР, ИФА)

ОПИСАНИЕ

Коронавирусы ‒ это крупные оболочечные вирусы с одноцепочечной РНК, имеющие шипики на поверхности капсида. Коронавирусы кошек (Feline Coronavirus, FCoV), как и коронавирус собак, принадлежат к коронавирусам группы 1a. Возможно заражение кошек коронавирусом собак с развитием симптомов, аналогичных инфекции FСoV. Существует два серотипа FСoV (тип 1 и тип 2), которые используют различные рецепторы для проникновения в клетку, однако вызывают сходные клинические проявления. Более распространенным является тип 1.

Коронавирус: как выглядит под микроскопом (3D-модель)

FCoV вызывает энтерит, также инфекционный перитонит кошек (Feline Infectious Peritonitis, FIP) ‒ тяжелое системное заболевание, сопровождающееся пиогранулематозным воспалением, прогрессирующее в течение нескольких недель или месяцев, которое всегда имеет летальный исход. FIP является основной причиной гибели котят и молодых кошек, особенно в условиях скученного содержания. Болезнь чаще всего проявляется у кошек в возрасте от трех месяцев до трех лет, при этом возраст минимум 50% пораженных животных составляет 12 месяцев и младше. FIP может встречаться у кошек любого возраста, и существует второй пик повышенной инцидентности болезни у пожилых кошек (старше10 лет), который, вероятно, связан со снижением функции иммунной системы у этих животных. Хотя болезнь может встречаться у кошек всех пород, к инфекции более восприимчивы чистопородные кошки, прежде всего абиссинские, австралийские дымчатые, бенгальские, бирманские, бурманские, британские короткошерстные, гималайские, рэгдол, рексы и скотиш-фолды. При содержании нескольких кошек в помещении происходит постоянное реинфицирование, выделение вируса и выздоровление, однако у некоторых животных наблюдается персистирование инфекции и продолжительное выделение FCoV при отсутствии клинических симптомов. Серопревалентность ниже у кошек при индивидуальном содержании. Однако, несмотря на высокую распространенность инфекции, при содержании нескольких кошек в помещении менее, чем у 10% из них развивается инфекция FIP. Таким образом, хотя инцидентность инфекции является высокой, инцидентность клинической формы болезни при содержании одной или двух кошек составляет 1 к 5000; в питомниках этот показатель составляет от 5 до 10% животных. Таким образом, FIP обычно является спорадически встречающимся заболеванием, которое не передается между кошками. Иногда в питомниках наблюдаются вспышки болезни, при этом смертность может превышать 10% от содержащихся в питомнике животных.

Будучи оболочечным вирусом, FCoV быстро инактивируется дезинфектантами и может сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение одного-двух дней при комнатной температуре. При определенных условиях вирус может выживать во внешней среде в течение более продолжительного времени (до семи недель). При этом контаминированные предметы могут быть важным фактором передачи инфекции.

Первичная инфекция длится в течение 7–18 месяцев, в этот период наблюдается наиболее интенсивное выделение вируса. Первичная инфекция может иметь три исхода: a) выздоровление; b) персистентное выделение вируса; c) рекуррентное или периодическое выделение вируса. При содержании нескольких кошек часто наблюдается реинфекция.

У котят после первичного или вторичного инфицирования интенсивность выделения вируса выше, чем у взрослых кошек. Это является важным фактором, поскольку развитие клинических признаков FIP чаще наблюдается у кошек в возрасте младше одного года. Иммуносупрессия, вызванная инфекцией вируса иммунодефицита кошек (FIV), а также другими причинами, обуславливает повышение интенсивности выделения FECV в. 10–100 раз, а также вероятность развития FIP.

У котят, рожденных кошками, инфицированными FECV, обычно не наблюдается выделения вируса до достижения возраста девяти недель. Таким образом, передача вируса происходит не внутриутробно, а после родов.

Инкубационный период FIP характеризуется значительной вариабельностью. Инфицирование котят происходит обычно в возрасте 4–8 недель, когда исчезают материнские антитела, однако имеются данные об инфекции у котят в возрасте двух недель. Заболевание может развиться через несколько недель после инфицирования, но чаще через 6–18 месяцев. Даже после развития системного пиогранулематозного воспалительного заболевания клинические признаки могут не проявляться в течение нескольких месяцев.

Клинические симптомы FIP часто меняются с течением времени и зависят от поражения тех или иных органов, преобладания воспалительных либо экссудативных процессов. Наиболее распространенными симптомами являются летаргия, отсутствие аппетита периодическая лихорадка, которая не поддается антибиотикотерапии. У некоторых кошек наблюдаются полиурия и полидипсия.

Возможно образование плевральных или абдоминальных выпотов. На долю FIP приходится около 10% случаев перикардиального выпота у кошек, данная инфекция является третьей наиболее распространенной причиной этой патологии после кардиомиопатии и неоплазии. В некоторых случаях перикардиальный выпот может вызывать тампонаду сердца. Пиогранулематозные или гранулематозные воспалительные процессы вызывают брыжеечную лимфаденопатию, реномегалию, развитие новообразований кишечника, гепатомегалию, желтуху, пневмонию, увеит, хориоренит. У 10% кошек при FIP наблюдаются неврологические симптомы, такие как локальные и генерализованные судороги, которые вызываются преимущественно менингоэнцефалитом, менингомиелитом, эпендимитом и обструктивной гидроцефалией. В некоторых случаях отмечается выраженная анемия, вызванная иммунообусловленным гемолизом или микроангиопатией.

Окончательный диагноз при FIP ставится только на основании результата иммуногистохимического окрашивания антигена коронавируса при наличии пиогранулематозного или гранулематозного васкулита. Ввиду сложности получения биоптатов у кошек при FIP, прижизненная диагностика инфекции часто основана на данных анамнеза, результатах клинического осмотра и лабораторных исследований, а также на исключении других возможных причин болезни. Вследствие того, что образование выпотов является характерной особенностью болезни, необходимо получение соответствующих образцов и их исследование. Результаты исследования выпота могут быть более информативными, чем результаты исследования крови.

Для обнаружения FCoV были разработаны тест-системы ПЦР с обратной транскрипцией, однако они не позволяют дифференцировать вирулентные и авирулентные штаммы вируса. Поскольку авирулентные штаммы могут обнаруживаться в крови и других тканях кошек, у которых отсутствует FIP, диагностическое значение имеет обнаружение вируса лишь в желудочно-кишечном тракте. Возможно получение ложноотрицательных результатов исследования методом ПЦР при низкой концентрации вируса в исследуемом образце либо в результате разрушения вирусной РНК при длительном хранении. Для диагностики FIP клинически значимым будет являться обнаружение РНК вируса в выпотной жидкости при экссудативной форме инфекции.

ПРЕАНАЛИТИКА

В зависимости от клинической картины, для диагностики данного заболевания методом ПЦР доступны следующие локализации:

• AN330 ЛИК — в качестве биоматериала берут ликвор, в пробирку с ЭДТА. Образец стабилен при температуре +2.+ 8 ℃ в течение 3-х дней;
• AN 331 ПРК — в качестве биоматериала берут соскоб эпителиальных клеток прямой кишки в микропробирку с транспортной средой. Образец стабилен при температуре +2.+8 ℃ в течение 10 дней;
• AN 330 ВПТ — в качестве биоматериала берут выпотную жидкость из брюшной или грудной полости в пробирку с ЭДТА. Образец стабилен при температуре +2.+8 ℃ в течение 3- х дней;
• AN 330 БТК — в качестве биоматериала берут биоптат ткани в микропробирку с транспортной средой, замораживают (-17.- 23 ℃). В таком виде образец стабилен до месяца;
• AN 331 ФК — биоматериалом являются фекалии, которые помещаются в стерильный контейнер с красной крышкой. Образец стабилен при температуре +2.+8 ℃ в течение 3-х дней.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе РНК Feline Coronavirus.