Мутация в гене C-KIT (8,9,11 экзоны) (кошки)

Рецептор фактора роста тучных и стволовых клеток (SCFR), или белковая тирозинкиназа Kit (CD117) — рецепторная тирозинкиназа, продукт гена KIT. Впервые описан в 1987 году. Существует несколько изоформ белка.

Мутация в гене C-KIT приводит к неадекватной сигнализации и пролиферации клеток, несущих мутантный белок. Это играет основную роль в онкогенезе. Продукт экспрессии гена - протоонкоген CD117 у здорового животного синтезируется на поверхности тучных клеток, стволовых клеток, меланоцитов, интерстициальных клеток Кахаля в стенке органов ЖКТ, клеток потовых желез и отвечает за пролиферацию, дифференцировку и выживание клеток. Измененные варианты CD117, синтез которых обусловлен прежде всего мутациями гена KIT (c-kit), играет существенную роль в образовании многих типов опухолей, в том числе гастроинтестинальных стромальных опухолей (GIST/ГИСТ), острой миелоидной лейкемии (ОМЛ), меланомы, и тд.

ГИСТ отличаются высокой экспрессией маркера CD117, возникают в разных отделах ЖКТ из предшественников интерстициальных клеток Кахаля.

Опухоли тучных клеток кожи (ТСК) являются наиболее частыми злокачественными опухолями кожи у собак. Мутации в протоонкогене c-KIT коррелируют с патогенезом и агрессивностью МСТ.

Клинические проявления тучноклеточной неоплазии и биологическое поведение значительно различаются у разных видов млекопитающих, варьируя от одиночного доброкачественного образования до агрессивного системного злокачественного новообразования.

Определенные мутации в гене КIT у собак связаны с более злокачественными и смертельными заболеваниями. У кошек и человека подобные мутации в новообразованиях тучных клеток не коррелируют с прогнозом, однако имеют значение для диагностики и планирования лечения. Данные   мутации в гене плохо изучены у других видов, хотя аберрантное цитоплазматическое окрашивание белка Kit, обнаруженное в новообразованиях хорька, лошади и коровы, напоминает паттерны аберрантного окрашивания Kit, обнаруженные в опухолевых тучных клетках собак, кошек и людей.

Подготовка пациента: зависит от выбранного аналита для исследования.

Показания:

·       Подозрение на мастоцитому. 

·       Прогнозирование заболевания при МСТ.

·       Для определения потенциальной чувствительности опухолей к таргетной терапии при гастроинтестинальной стромальной опухоли (GIST, ГИСО), мастоцитоме.

·       Диагностика заболеваний, ассоциированных с мутацией cKit.

·       Перед началом химиотерапии и при дальнейшем мониторинге терапии.

·       При рецидиве заболевания, ассоциированного с мутацией cKit.

Противопоказания: неизвестны.

Метод отбора биоматериала: венепункция, ТИБ/ТИАБ, биопсия.

Преаналитика:

ВАЖНО! При заказе исследования из цельной крови необходимо приложить копию результата общего анализа крови. Допускаются в работу окрашенные стекла цитологические (не гистологические) с подтвержденный диагнозом «мастоцитома».

Порядок действий:

1. Биоптат ткани: поместить в стерильный контейнер с красной крышкой заполненный 70% спиртом в соотношении ткань:спирт 1:10. Если биоптат размером до 0,5 см - в качестве контейнера использовать эппендорф (наполненить 70% спиртом,  соотношение ткань:спирт то же). Плотно закрыть контейнер крышкой.  Если используется эппендорф - пробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.

2. Аспиратов ткани: использовать пробирку с розовой крышкой (ЭДТА). Поместить аспират на дно пробирки.  Если срок хранения и транспортировки превышает 48 часов, материал замораживается в пробирке.

3. Цельная кровь и костный мозг: набрать биоматериал строго до отметки на этикетки пробирки с розовой крышкой (ЭДТА).  Перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания биоматериала с антикоагулянтом.

4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

5. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С…+8°С (синий пакет). Для аспирата – если срок хранения превысил 48 часов, температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

Интерпретация результата: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный (обнаружена/не обнаружена мутация в гене C-kit: экзон 8, экзон 9 и экзон 11).

Источники:

1)     «Sensitivity for the detection of a clonally rearranged antigen receptor gene in endoscopically obtained biopsy specimens from canine alimentary lymphoma» Kenjiro Fukushima 1, Koichi Ohno, Yuko Koshino-Goto, Kazuyuki Uchida, Kohji Nomura, Masashi Takahashi, Ko Nakashima, Yasuhito Fujino, Hajime Tsujimoto.

2)     PMID: 20046040 DOI: 10.1292/jvms.001673 или J Vet Med Sci. 2009 Dec;71(12):1673-6. doi: 10.1292/jvms.001673.

3)     «First-time application of a PCR-based clonality assay in a large cohort of non-domestic felines» Sophia Unterkreuter 1, Annika Posautz 2, Barbara C Rütgen 3, Sandra Groiss 1, Anna Kübber-Heiss 2, Sabine E Hammer 4

4)     P Res Vet Sci. 2021 Mar;135:511-516. doi: 10.1016/j.rvsc.2020.11.011. Epub 2020 Nov 19.«MID: 33243452 DOI: 10.1016/j.rvsc.2020.11.011

5)     «Polymerase chain reaction for antigen receptor rearrangement: Benchmarking performance of a lymphoid clonality assay in diverse canine sample types» E. J. Ehrhart,Shukmei Wong,Keith Richter,Victoria Zismann,Carolyn Grimes,William Hendricks,Chand Khanna.

6)     First published: 02 April 2019 https://doi.org/10.1111/jvim.15485.

7)     «Cross Lineage Rearrangement in Feline Enteropathy-Associated T-cell Lymphoma» C. Andrews, M. Operacz, R. Maes, .First Published July 27, 2015, Veterinary Pathology.

8)     « Anaplastic Large T-Cell Lymphoma in the Intestine of Dogs»Lauren W. Stranahan, Derick Whitley, Tuddow Thaiwong, Matti Kiupel, Fabiano Oliveira; First Published June 6, 2019 Veterinary Pathology.

9)     «Results of histopathology, immunohistochemistry, and molecular clonality testing of small intestinal biopsy specimens from clinically healthy client-owned cats» Sina Marsilio,Mark R. Ackermann,Jonathan A. Lidbury,Jan S. Suchodolski,Jörg M. Steiner ; February 2019.

10)   «Gastrointestinal stromal tumors: a comprehensive review» Trisha M. Parab, Michael J. DeRogatis, Alexander M. Boaz, Salvatore A. Grasso, Paul S. Issack2, David A. Duarte, Olivier Urayeneza, Saloomeh Vahdat, Jian-Hua Qiao, Gudata S. Hinika; JGO No 1 (February 2019).