Посев на грибы рода Candida с определением чувствительности к антимикотическим препаратам

Кандидоз – микоз, вызванный грибами рода Candida. C. albicans – диплоидный грибок (молочница) форма дрожжеподобных грибов, способных к спариванию, но не в форме мейоза, является наиболее распространенным видом дрожжей, вызывающих инвазию у животных. В роду Candida насчитывается более 200 видов. Эти грибы входят в состав нормальной флоры слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, носовой полости и половых органов млекопитающих. У гусей, индеек чаще инфицирует клоаку и воздухоносные пути, у коров вызывает снижение плодовитости, аборты, маститы, у кобыл приводит к развитию пиометры, у кошек к циститам и пиотораксу, и также , как и у лошадей, к заболеванию глаз, у собак , телят, свиней и кошек встречается генерализованная форма заболевания.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Развитию кандидоза способствуют длительное лечение антибиотиками, иммуносупрессивная терапия, понижение клеточного иммунитета любой этиологии, инфицированность вирусом иммунодефицита или лейкоза, нейтропения (у собак), сахарный диабет, парвовирусная инфекция, длительное применение глюкокортикоидов, повреждение слизистой оболочки или кожного покрова. Также в анамнезе у пациентов с кандидозом ожоги, травмы, оперативное вмешательство, постоянный катетер. Симптомы заболевания различаются в зависимости от особенностей, локализации или диссеминации возбудителя. При локализации возбудителя в ротовой полости обнаруживают белые пораженные участки на языке, слизистой оболочке, губах, кожно-слизистой кайме; при локализации в кишечнике - хроническую диарею, похудение. Поражение уха проявляется воспалением наружного слухового прохода и/или средним отитом, гениталий-белыми выделениями из влагалища или препуция, кожного покрова – незаживающим эритематозным мокнущим изъязвлением. Симптоматика системного кандидоза зависит от места образования микроабсцессов и может включать лихорадку, дерматит, передний увеит, плевральный выпот, остеомиелит, диарею, расстройства функций ствола мозга или мозжечка.

Кандидоз следует дифференцировать с другими инфекционными болезнями ротовой полости (бластомикозом, гистоплазмозом, вирусными болезнями кошек и др.), эзофагитом, острым или хроническим пищеводным рефлюксом и рвотой, последствиями травмы или внедрения чужеродного тела. Системный кандидоз дифференцируют с бактериальным сепсисом или токсемией, другими системными микозами, аутоиммунными болезнями, аллергическим дерматозом, вирусными инфекциями, новообразованиями, выраженными нарушениями метаболизма и анафилаксией.

При диссеминированных формах кандидоза развиваются обширные поражения внутренних органов, представленные множественными белыми очагами в сердце, печени, селезенке и других органах в зависимости от хода эмболизации. При микроскопическом исследовании эти очаги определяют как абсцессы или участки некроза, содержащие бластоконидии, псевдогифы и настоящие гифы.

Для подтверждения диагноза могут понадобиться соскоб или биопсия кожи. Выделение Candida spp. из фекалий обычно недостоверно, в то время как из мочи более вероятно, чем из крови, поскольку при диссеминированных формах болезни часто наблюдается эмболизация почек. Лучше брать артериальную кровь для бактериологического исследования.

Растет Candida albicans в аэробных условиях при 37℃ на широком спектре питательных сред, в том числе на Сабуро декстрозном агаре. Образует выпуклые колонии от белого до бежевого и кремового цветов на поверхности селективной среды. Главными признаками для идентификации являются образование "ростковой трубки" и/или псевдомицелия и хламидоспоры.

Исследуемый аналит: перитонеальная, торакальная, перикардиальная жидкости, синовия, ликвор, пунктат среднего/внутреннего уха.

Метод исследования: микологический, бактериоскопический.

Показания: сепсис, выпоты в полости организма, отиты среднего/внутреннего уха, неврологические симптомы, хромота в качестве рекомендуемого дополнительного теста к AN477 -А или AN477-Р у животных, у которых в анамнезе длительная терапия антибиотиками или иммуносупрессивными препаратами.

Противопоказания: для лапароцентеза – расширенные петли кишечника; полная кишечная непроходимость; органомегалия; увеличенная матка (беременность); нужно избегать быстрой эвакуации большого объема жидкости, особенно без предшествующего поступления натрия.

Для перикардиоцентеза – недостаточный объем перикардиального выпота, когда риск перикардиоцентеза превосходит его потенциальную пользу. Относительными противопоказаниями могут являться: геморрагический перикардиальный выпот, обусловленный геморрагическими состояниями, или капиллярное эндокардиальное кровотечение, когда снижение давления в полости перикарда может усилить кровотечение. Перикардиоцентез не показан при увеличении размеров перикарда при солидных опухолях или наличии в его полости органов брюшной полости (при диафрагмальных грыжах).

Торакоцентез не следует проводить у животных с нарушенным гомеостазом.

Пункция СМЖ является инвазивной процедурой, для нее характерны все присущие данному виду вмешательств риски:

1. процедура не проводится при повышенном внутричерепном давлении;
2. вследствие повышенного риска кровоизлияния в субарахноидальное пространство, пункцию СМЖ не проводят при тромбоцитопении.

Противопоказаний для пункции содержимого среднего/внутреннего уха и суставов практически нет.

Подготовка пациента: инвазивные процедуры при наличии болевого синдрома проводятся под общей анестезией. Перед этим обязательно выдерживается голодная диета не менее 6-12 часов. Иногда для пожилых пациентов за несколько дней проводится предоперационное обследование (анализы крови и мочи, УЗИ брюшной полости, ЭКГ и ЭХОКГ и пр.) на усмотрение анестезиолога с дальнейшей оценкой степени анестезиологического риска. Перед люмбальной пункцией биоматериал отбирается до введения контраста при миелографии или не ранее чем через 5 дней после проведения процедуры.

Отменить применение системных антибактериальных средств за 7 дней до проведения анализа!

Метод отбора: торакоцентез, плевроцентез, лапароцентез, люмбальная пункция, парацентез, артроцентез.

Преаналитика: для плевральной, перикардиальной, перитонеальной жидкости:

1. провести процедуру пункции соответствующей полости с соблюдением правил асептики/антисептики;
2. аспирировать жидкость при помощи шприца и перенести с промежуточную стерильную пробирку с желтой крышкой. Необходимый объем биоматериала, необходимый для отбора в транспортную пробирку, 5 мл;
3. тампон на аппликаторе от транспортной среды Amies (Эймс) опустить в пробирку с желтой крышкой, пропитать набранной жидкостью и погрузить в среду Amies (Эймс) (перед использованием флакон с жидкой транспортной средой согреть до комнатной температуры;
4. надломить аппликатор в точке отлома (линия отмечена красным цветом) и оставить его в пробирке!
5. допускается внесение аспирированной жидкости в транспортный контейнер с жидкой средой Amies (Эймс) в объеме не более 0,3 мл непосредственно из шприца. При таком способе внесения биоматериала в транспортную пробирку-тампон на аппликаторе также помещается в среду Amies (Эймс) и оставить его в пробирке!
6. для синовиальной жидкости, ликвора порядок манипуляций аналогичен пунктам 3-6;
7. минимальный объем синовии и ликвора для корректного отбора в транспортную среду – 1 мл;
8. при пунктировании полости среднего/внутреннего уха порядок манипуляций аналогичен пункту 6 в связи с незначительным объемом жидкости;
9. контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента и обязательно время отбора пробы!
   

Единицы измерения: КОЕ/тамп.

Форма выдачи результата: в результате даётся информация:

1. об отсутствии или наличии роста;
2. о количестве выросших в посеве грибов рода Candida;
3. о видовой принадлежности;
4. о чувствительности к антимикотическим препаратам (если количество более 10* 1 КОЕ/тампон).

В случае отсутствия роста грибов выдается формулировка результата: «Роста Candida spp. не выявлено».

Список источников:

1. Concise Review of Veterinary Microbiology. Second Edition. P.J. Quinn, B.K. Markey, F.C. Leonard, E.S. FitzPatrick, S. Fanning;
2. Veterinary Microbiology and Microbial Disease. Second Edition. P. J. Quinn, B.K. Markey, F. C. Leonard, E. S. Fitz Patric, S. Fanning, P.J. Hartigan.
3. Болезни кошек и собак: справ; (пер. с англ.). Л. Тилли, Ф. Смит мл.. 2010 г.