Toxoplasma gondii (ПЦР)
Токсоплазма ‒ род паразитических протистов класса споровики, отряда кокцидии, включающий один вид – Toxoplasma gondii. Эта кокцидия является самым распространенным внутриклеточным паразитом теплокровных животных. Окончательными хозяевами паразита являются кошки, в организме которых происходит завершение половой фазы развития токсоплазмы (энтероэпителиальный цикл), после чего с фекалиями выделяются ооцисты, устойчивые к действию факторов внешней среды. После контакта с кислородом при определенной температуре и влажности внутри ооцист в течение 1-5 дней происходит развитие, этот процесс называется спорулированием. После проглатывания из ооцист выходят спорозоиты. Спорозоиты дают начало развитию тахизоитов, которые через стенку желудочно-кишечного тракта кошек и промежуточных хозяев проникают в кровь и лимфу.
T. gondii может проникать в большинство клеток млекопитающих и проходить там бесполое размножение, которое продолжается до разрушения клетки. При наличии иммунного ответа репликация тахизоитов приостанавливается, и происходит развитие медленно делящихся брадизоитов, которые персистируют в цистах в тканях вне кишечника.
Тахизоиты и брадизоиты, кроме общих антигенов, имеют отличающиеся антигены: брадизоиты имеют антигены SAG4(p18) и BSR4(p36), а тахизоиты – SAG1, SAG2.
Тканевые цисты могут формироваться в центральной нервной системе, мышцах и внутренних органах. Возможна персистенция брадизоитов в тканевых цистах на протяжении всей жизни животного-хозяина. Серопревалентность к T. gondii варьирует в зависимости от образа жизни и возраста животного. У собак выделения ооцист T. gondii не наблюдается, однако они могут механически переносить цисты при контакте с контаминированными фекалиями кошек. У собак клиническая форма болезни вызывается тканевой фазой инфекции T. gondii.
Инфицирование теплокровных животных происходит после проглатывания одной из трех стадий T. gondii (спорозоитов, тахизоитов, брадизоитов), также может иметь место трансплацентарная передача. После проглатывания тахизоитов они превращаются в мерозоиты, которые размножаются в эпителиальных клетках желудочно-кишечного тракта, после чего трансформируются в микро- и макрогаметы. При проникновении микрогамет в макрогаметы происходит образование зигот с последующим формированием неспорулированных ооцист, которые выделяются с фекалиями в течение 3-20 дней. После спорулирования (образования спорозоитов в ооцисте) ооцисты могут выживать во внешней среде в течение нескольких месяцев или лет, они устойчивы к действию большинства дезинфектантов. Развитие клинической формы токсоплазмоза определяется особенностями взаимодействий «паразит‒хозяин», штаммом токсоплазм, наличием иммуносупрессии.
У собак инфекция респираторного, желудочно-кишечного тракта и нервно-мышечной ткани сопровождается лихорадкой, рвотой, диареей, угнетением дыхания, атаксией, судорогами, а при генерализованной инфекции обычно наблюдается желтуха. Генерализованный токсоплазмоз чаще всего встречается у собак с иммуносупрессией, например, при чуме плотоядных, либо получающих лечение циклоспоринами для предотвращения отторжения трансплантатов. Неврологические симптомы отмечаются при соответствующей локализации инфекции и включают атаксию, судороги, дрожь, неврологический дефицит черепно-мозговых нервов, парезы и параличи. При миозите, вызванном токсоплазмозом, у собак наблюдаются слабость, напряженная походка или мышечная атрофия. Также возможно быстрое прогрессирование тетрапареза и дисфункции нижнего моторного нейрона. У некоторых собак поражается миокард, что сопровождается желудочковыми аритмиями, могут возникать ретинит, передний увеит, иридоциклит и неврит зрительного нерва, а также поражения кожи, сопровождаемые зудом, образованием пустул, подкожных узелков и/или алопецией.
Диагностика токсоплазмоза требует корректной интерпретации результатов клинических, цитологических, паразитологических, серологических исследований и исследования методом ПЦР.
Существующие тест-системы ПЦР позволяют обнаруживать ДНК T. gondii в фекалиях больных кошек и дифференцировать токсоплазм от других патогенов. ДНК T. gondii также может быть обнаружена в образцах крови здоровых собак и кошек, поэтому ПЦР обычно используется совместно с цитологическими, гистопатологическими или серологическими исследованиями. Наиболее точный диагноз при токсоплазмозе, сопровождающимся поражением центральной нервной системы (ЦНС), может быть поставлен при обнаружении в сыворотке, цельной крови, выпотной или спинномозговой жидкости (СМЖ) специфичных антител к T. gondii и получении положительных результатов исследования данных образцов методом ПЦР.
Исследуемый аналит: асцитическая , торакальная, перикардиальная.
Метод исследования: ПЦР Real-time.
Подготовка пациента: лапароцентез и плевроцентез – минимально инвазивные манипуляции, которые легко провести; она сопряжена с минимальным риском и дискомфортом животного. Процедура обычно проводится без наркоза; седация может потребоваться в том случае, если животное беспокойно ( особенно кошки) или испытывает боль. Перед проведении процедуры перикардиоцентеза, необходимо информировать владельца животного о потенциальных рисках и осложнениях вмешательства , вероятность которых зависит не только от опытности специалиста, но также и от причины перикардиального выпота (часто неивестной на момент выполнения процедуры). Перикардиоцентез также может усугублять кровотечение из крупных и нежных опухолей, что , в свою очередь может усиливать тампонаду или индуцировать остановку сердца и дыхания.
Показания: скопление жидкости в брюшной, грудной , перикардиальной полостях , подтвержденное данными физикального обследования и диагностической визуализации (рентгенографическое исследование , УЗИ грудной и брюшной полости, данных ЭХОКГ).
Противопоказания: для лапароцентеза - расширенные петли кишечника; полная кишечная непроходимость; органомегалия; увеличенная матка (беременность); нужно избегать быстрой эвакуации большого объема жидкости, особенно без предшествующего поступления натрия.
Для перикардиоцентеза – недостаточный объем перикардиального выпота, когда риск перикардиоцентеза превосходит его потенциальную пользу.
Относительными противопоказаниями могут являться: геморрагический перикардиальный выпот, обусловленный геморрагическими состояниями, или капиллярное эндокардиальное кровотечение, когда снижение давления в полости перикарда может усилить кровотечение. Перикардиоцентез не показан при увеличении размеров перикарда при солидных опухолях или наличии в его полости органов брюшной полости (при диафрагмальных грыжах).
Торакоцентез не следует проводить у животных с нарушенным гомеостазом.
Метод отбора биоматериала: лапароцентез, торакоцентез, перикардиоцентез.
Преаналитика:
- провести пункцию соответствующей полости тела;
- перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА);
- после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
- заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
- пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
- заполнить направительный бланк, указав код клиента;
- сохранность образца при – 17 ℃…-23℃ 1 месяц;
- температурный режим транспортировки в лабораторию – 17 ℃…-23℃ (красный пакет);
МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ ВЫПОТНОЙ ЖИДКОСТИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ
Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.
Форма выдачи результата: качественный анализ.
Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Toxoplasma gondii.
Литература:
- Craig E. Greene, Infectious dieseases of the dog and cat , fourth editionШ.Ваден, Д.Нолл, Ф.
- Смит, Л. Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.
