Чума плотоядных (Canine distemper virus) (ПЦР)

Чума плотоядных (Febris catar-rhalis infectiosa canis), чума собак, болезнь Карре, острая вирусная болезнь животных семейства псовых и куньих, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек, пневмонией, расстройством функции нервной системы и желудочно-кишечного тракта. Заболевание широко распространено во всех странах мира; летальность достигает от 30 до 90%.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Вирус чумы собак (Canine distemper virus, CDV) одноцепочечный РНК вирус из семейства Paramyxoviridae, в настоящее время известен как Canine morbillivirus. Как этиологический агент чумы собак (canine distemper), вирус известен с 1760 года. Будучи высокотропным к эпителиальным, лимфоидным и тканям нервной системы CDV поражает системы органов дыхания, пищеварения, лимфатической системы, кожи, скелета и центральной нервной системы. Различные штаммы вируса имеют разную степень патогенности и вызывают различные клинические проявления этой инфекции.

Источники возбудителя инфекции больные и переболевшие животные. Инфицированные животные выделяют вирус с истечениями из носа, глаз, слюной, мочой и калом спустя 7 дней после заражения и до трех месяцев после переболевания.

Чума плотоядных регистрируется в любое время года, но наиболее часто весной и осенью. Вирус чувствителен к высоким температурам, ультрафиолетовому излучению, эфиру, хлороформу, фенолу, аммиачным соединениям. Обычная дезинфекция эффективна и уничтожает CDV в окружающей стреде.

Антитела у щенков исчезают после прекращения вскармливания грудным молоком в течение 3 - 6 месяцев.

Характерны два способа заражения: оральный и респираторный при прямом контакте с заражённым животным, либо через загрязненные вирусом корма, воду, воздух, выделения больных животных и различные предметы ухода за ними.

В патогенезе чумы отмечают следующие основные периоды. После внедрения через слизистые оболочки CDV реплицируется в макрофагах, посредством которых попадает в лимфоидные ткани миндалин и бронхиальных лимфатических узлов. К 4-6 дням инфицирования патоген атакует лимфоидные ткани всего организма, что сопровождается повышением температуры и выраженной лейкопенией в результате поражения Т и В-клеток. Между 8-9 днями течения болезни у собак отмечается поражение эпителиальных тканей ЦНС посредством клеточно-ассоциированной виремии. Важно помнить, что контагиозными собаки становятся в период распространения вируса в организме. К 14 дню инфицирования при адекватном ответе иммунной системы может наступить полное освобождение организма от вируса. Ослабленный иммунитет, стрессовые ситуации, воздействие высоких концентраций высоковирулентных вирусных частиц к 9 – 14 дню инфицирования приводят к генерализованной инфекции и летальному исходу. Течение заболевания усугубляется активацией вторичных бактериальных инфекций.

CDV проникает через плацентарный барьер, при этом велика вероятность абортов, появления мертворожденных или ослабленных щенков. Щенки, инфицированные внутриутробно иммуносупрессивны, у них возможно проявление неврологических проявлений.

Системная инфекция CDV нередко осложняется сальмонеллёзом, приводящим к геморрагической диарее и сепсису. Отмечают сочетанное инфицирование CDV, Toxoplasma gondii или Neosporum caninum, приводящее к миозитам и радикулоневритам. Данный момент необходимо учитывать при комплексной диагностике.

Диагноз на чуму плотоядных основывается на клинических проявлениях заболевания у не привитых щенков в возрасте от 3 до 6 месяцев. В лабораторной практике для определения сывороточных антител класса IgG и IgM к CDV используется ИФА. Повышенные титры сывороточных антител класса IgM выявляются в сыворотке крови собак в период острой фазы на 8 день инфицирования. Высокие титры антител IgG могут свидетельствовать о перенесенном заболевание или проведенную вакцинацию. ИФА, направленный на выявление антител IgG позволяет диагностировать хроническую форму чумы с инфицированием тканей нервной системы.

В настоящее время для подтверждения диагноза используется ОТ-ПЦР в режиме реального времени, которая позволяет выявить РНК вируса в тканях и жидкостях заболевшего животного. Установлено, что максимальная вирусная нагрузка выявлена в пробах мочи, смывах с конъюнктивы и миндалин, цельной крови что делает данные виды биоматериала максимально информативными.

Исследуемый аналит: эпителий конъюнктивы.

Метод исследования: ПЦР – Real-time.

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов; при наличии гнойного отделяемого, необходимо предварительно его удалить при помощи чистой марлевой салфетки, смоченной 0,9% физиологическим раствором (NaCl).

Показания:

• наличие истечений из конъюнктивальных мешков (слизистых или гнойных);
• гиперемия конъюнктивы;
• боль в глазах (блефароспазм, животное трет лапой глаз);
• выявление объемных образований или гиперплазии конъюнктивы.

Противопоказания: наличие тяжелой патологии роговицы может приводить к ее перфорации во время процедуры.

Метод отбора биоматериала: соскоб эпителиальных клеток конъюнктивы с помощью зонда.

Преаналитика: 

1. Урогенитальный зондом набрать клеточный материал с конъюнктивы.
2. Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.
3. Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
4. Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.
5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
6. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2℃…+8℃ (синий пакет)

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе РНК Canine distemper virus, CDV.

Использованная литература:

1. Rendon-Marin S, da Fontoura Budaszewski R, Canal CW, Ruiz-Saenz J.Tropism and molecular pathogenesis of canine distemper virus.
   Virol J. 2019 Mar 7;16(1):30. doi: 10.1186/s12985-019-1136-6
2. Klotz D, Baumgärtner W, Gerhauser I.Type I interferons in the pathogenesis and treatment of canine diseases.
   Vet Immunol Immunopathol. 2017 Sep;191:80-93. doi: 10.1016/j.vetimm
3. Martinez-Gutierrez M, Ruiz-Saenz J. Diversity of susceptible hosts in canine distemper virus infection: a systematic review and data synthesis.
   BMC Vet Res. 2016 May 12;12:78. doi: 10.1186/s12917-016-0702-z