Посев на грибы рода Candida с определением чувствительности к антимикотическим препаратам

Кандидоз – микоз, вызванный грибами рода Candida. C. albicans – диплоидный грибок (молочница) форма дрожжеподобных грибов, способных к спариванию, но не в форме мейоза, является наиболее распространенным видом дрожжей, вызывающих инвазию у животных. В роду Candida насчитывается более 200 видов. Эти грибы входят в состав нормальной флоры слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, носовой полости и половых органов млекопитающих. У гусей, индеек чаще инфицирует клоаку и воздухоносные пути, у коров вызывает снижение плодовитости, аборты, маститы, у кобыл приводит к развитию пиометры, у кошек к циститам и пиотораксу, и также, как и у лошадей, к заболеванию глаз, у собак, телят, свиней и кошек встречается генерализованная форма заболевания.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Развитию кандидоза способствуют длительное лечение антибиотиками, иммуносупрессивная терапия, понижение клеточного иммунитета любой этиологии, инфицированность вирусом иммунодефицита или лейкоза, нейтропения (у собак), сахарный диабет, парвовирусная инфекция, длительное применение глюкокортикоидов, повреждение слизистой оболочки или кожного покрова. Также в анамнезе у пациентов с кандидозом ожоги, травмы, оперативное вмешательство, постоянный катетер. Симптомы заболевания различаются в зависимости от особенностей, локализации или диссеминации возбудителя. При локализации возбудителя в ротовой полости, обнаруживают белые пораженные участки на языке, слизистой оболочке, губах, кожно-слизистой кайме; при локализации в кишечнике - хроническую диарею, похудение. Поражение уха проявляется воспалением наружного слухового прохода и/или средним отитом, гениталий-белыми выделениями из влагалища или препуция, кожного покрова – незаживающим эритематозным мокнущим изъязвлением. Симптоматика системного кандидоза зависит от места образования микроабсцессов и может включать лихорадку, дерматит, передний увеит, плевральный выпот, остеомиелит, диарею, расстройства функций ствола мозга или мозжечка.

Кандидоз следует дифференцировать с другими инфекционными болезнями ротовой полости (бластомикозом, гистоплазмозом, вирусными болезнями кошек и др.), эзофагитом, острым или хроническим пищеводным рефлюксом и рвотой, последствиями травмы или внедрения чужеродного тела. Системный кандидоз дифференцируют с бактериальным сепсисом или токсемией, другими системными микозами, аутоиммунными болезнями, аллергическим дерматозом, вирусными инфекциями, новообразованиями, выраженными нарушениями метаболизма и анафилаксией.

При диссеминированных формах кандидоза развиваются обширные поражения внутренних органов, представленные множественными белыми очагами в сердце, печени, селезенке и других органах в зависимости от хода эмболизации. При микроскопическом исследовании эти очаги определяют как абсцессы или участки некроза, содержащие бластоконидии, псевдогифы и настоящие гифы.

Для подтверждения диагноза могут понадобиться соскоб или биопсия кожи. Выделение Candida spp. из фекалий обычно недостоверно, в то время как из мочи более вероятно, чем из крови, поскольку при диссеминированных формах болезни часто наблюдается эмболизация почек. Лучше брать артериальную кровь для бактериологического исследования.

Растет Candida albicans в аэробных условиях при 37℃ на широком спектре питательных сред, в том числе на Сабуро декстрозном агаре. Образует выпуклые колонии от белого до бежевого и кремового цветов на поверхности селективной среды. Главными признаками для идентификации являются образование "ростковой трубки" и/или псевдомицелия и хламидоспоры.

Исследуемый аналит: простатическая фракция спермы, отделяемое шейки матки, содержимое кисты/абсцесса предстательной железы.

Метод исследования: микологический, бактериоскопический.

Показания: в качестве дополнительного рекомендуемого теста к AN446-А или 446-Р у животных, в анамнезе у которых длительная терапия антибиотиками или иммуносупрессивными препаратами.

Противопоказания: не известны.

Подготовка пациента: отменить применение системных и местных антибактериальных средств за 7 дней до проведения анализа, провести туалет наружных половых органов.

Метод отбора: аспирация содержимого кисты/абсцесса предстательной железы с помощью шприца, получение спермы методом массажа простаты, смыв с шейки матки с помощью вагиноскопа.

Преаналитика:

1. для самцов: провести процедуру взятия спермы с разделением по фракциям по стерильным пробиркам. В лабораторию присылается только спермальная или простатическая фракция;
2. опустить тампон на аппликаторе (ESwab) от комплекта транспортной среды Amies (Эймс) в полученный биоматериал, вращательными движениями «набрать» материал на тампон и перенести его в пробирку с жидкой средой Amies (Эймс). Надломить зонд в красной линии отлома и закрыть крышку транспортной пробирки;
3. допускается внести в жидкую транспортную среду Amies (Эймс) не более 0,3 мл спермальной/простатической фракции;
4. при наличии кист в простате: под контролем УЗИ аспирировать жидкость при помощи шприца и перенести в промежуточную стерильную пробирку с желтой крышкой. Мининмальный объем биоматериала, необходимый для отбора в транспортную пробирку, не менее 0,5 мл;
5. для самок: под контролем вагиноскопа ввести 5 мл стерильного 0,9% -го физраствора в область шейки матки, аспирировать обратно;
6. полученный смыв поместить в стерильную промежуточную пробирку с желтой крышкой, опустить в нее тампон на аппликаторе (ESwab) от комплекта транспортной среды Amies (Эймс), вращательными движениями «набрать» материал на тампон и погрузить в среду Amies (Эймс) (перед использованием флакон с жидкой транспортной средой согреть до комнатной температуры);
7. надломить аппликатор в точке отлома (линия отмечена красным цветом) и оставить его в пробирке;
8. допускается внесение смыва с шейки в транспортный контейнер с жидкой средой Amies (Эймс) в объеме не более 0,3 мл непосредственно из шприца. При таком способе внесения биоматериала в транспортную пробирку тампон на аппликаторе помещается в среду Amies (Эймс), даже если он не использовался!;
9. надломить аппликатор в точке отлома (линия отмечена красным цветом) и оставить его в пробирке!
10. контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента и обязательно время отбора пробы!
11. температурный режим хранения и транспортировки +2℃...+8℃ в течение 48 часов.

Единицы измерения: КОЕ/тамп.

Форма выдачи результата: в результате даётся информация:

• об отсутствии или наличии роста;
• о количестве выросших в посеве грибов рода Candida;
• о видовой принадлежности;
• о чувствительности к антимикотическим препаратам (если количество более 10* 1 КОЕ/тампон).

В случае отсутствия роста грибов выдается формулировка результата: «Роста Candida spp. не выявлено».

Список источников:

1. Concise Review of Veterinary Microbiology. Second Edition. P.J. Quinn, B.K. Markey, F.C. Leonard, E.S. FitzPatrick, S. Fanning;
2. Veterinary Microbiology and Microbial Disease. Second Edition. P. J. Quinn, B.K. Markey, F. C. Leonard, E. S. Fitz Patric, S. Fanning, P. J. Hartigan.
3. Болезни кошек и собак: справ; (пер. с англ.). Л. Тилли, Ф. Смит мл.. 2010 г.