Криптококкоз (Cryptococcus spp.) (ПЦР)

К роду Cryptococcus относятся минимум 19 видов инкапсулированных дрожжей. Криптококкоз является наиболее распространенным системным грибковым заболеванием кошек, собак и других животных, а также людей во всем мире. Это вызвано комплексом видов Cryptococcus neoformans - Cryptococcus gattii, который включает восемь генотипов и несколько подтипов (штаммов) с различным географическим распространением, патогенностью и чувствительностью к антимикробным препаратам. Прогноз в большинстве случаев благоприятный, если диагноз поставлен достаточно рано и сохраняется длительное лечение. Базидиоспоры являются инфекционными агентами видов Cryptococcus, поскольку они проникают в дыхательную систему и вызывают первичную инфекцию. Бессимптомная колонизация дыхательных путей встречается чаще, чем клиническое заболевание. Птичий помет, особенно голубиный, создает благоприятные условия для размножения C. neoformans. Оба вида криптококков связаны с гниющей растительностью.

Жизненный цикл Cryptococcus spp. включает рост возбудителя в тканях хозяина в виде инкапсулированных почкующихся дрожжей, при существовании в окружающей среде грибы способны образовывать мицелий. Капсула грибка после проникновения в организм хозяина утолщается, что обеспечивает защиту от фагоцитоза. В тканях криптококки размножаются с образованием одной или двух дочерних клеток (почек), соединенных с родительской клеткой тонким мостиком.

Криптококкоз, вызываемый C neoformans или C gattii, клинически неотличим. Заболевание может поражать: дыхательную, центральную нервную системы (которая может происходить из назальной формы или возникать независимо), кожной и системной формах.

Криптококкоз часто диагностируют у взрослых молодых собак. В отличие от кошек, у собак криптококкоз обычно принимает тяжелую диссеминированную форму. Распространенными неспецифическими признаками болезни являются снижение массы тела, летаргия и отсутствие аппетита. Риносинусит при криптококкозе протекает в субклинической форме, поэтому его инцидентность может недооцениваться. У больных собак наблюдаются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта и поджелудочной железы, такие как рвота, диарея и абдоминальная боль. При проведении посмертного вскрытия более чем у половины собак обнаруживают признаки поражения нижних дыхательных путей, которые редко сопровождаются клиническими симптомами при жизни. К другим клиническим симптомам, иногда наблюдаемым у собак, относятся периферическая лимфаденомегалия и хромота (вызванная остеомиелитом или артритом). У многих собак, больных криптококкозом, летаргия и заторможенность вызваны вовлечением в патологический процесс ЦНС. К другим симптомам со стороны ЦНС относятся нарушение зрачковых реакций, нистагм, мидриаз, наклон головы, страбизм, анизокория, паралич лицевых мышц, парапарез, атаксия, хождение по кругу и судороги. Наиболее распространенными симптомами поражения глаз являются хориоретинит, отек диска зрительного нерва, неврит зрительного нерва и отслоение сетчатки. При поражении носовой полости может наблюдаться нарушение тока воздуха по носовым ходам. При этом отмечается образование узелков, масс и язв в носовой полости, на языке, слизистой оболочке щек, твердого неба и губ. Передача возбудителя возможна через контаминированные предметы, а также прямая передача больными животными.

Постановка окончательного диагноза при криптококкозе обычно не представляет сложности и основана на результатах цитологического исследования пораженных тканей, обнаружения антигена криптококков серологическими методами, бактериологического посева, а также исследования методом ПЦР. При этом используются мазки и смывы из носовой полости, аспираты из пораженных тканей, увеличенных лимфоузлов, бронхоальвеолярные смывы, плевральная жидкость, цереброспинальная жидкость и моча.

Существуют тест-системы ПЦР в реальном времени, позволяющие обнаруживать Cryptococcus spp. ПЦР позволяет подтвердить наличие ДНК криптококков в биологических жидкостях и тканях, когда иные методы исследования не дают однозначного результата.

Сроки исполнения: 4 дня (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: эпителий носовых ходов

Метод исследования: ПЦР-РТ

Показания: риносинусит; образование узелков, масс и язв в носовой полости, на языке, слизистой оболочке щек, твердого неба и губ; чихание, истечениями из носа (гнойными, кровянистыми или прозрачными); припухлость под кожей в области носа, поражения ротовой полости и увеличение лимфатических узлов.

Противопоказания: не известны.

Подготовка пациента: биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов; при наличии гнойного отделяемого необходимо предварительно его удалить при помощи чистой марлевой салфетки, смоченной 0,9% физиологическим раствором (NaCl).

Метод отбора: соскоб эпителиальных клеток слизистой носовой полости с помощью урогенитального зонда.

Преаналитика:

1. Урогенитальный зонд аккуратно ввести на глубину 0.1-0.3 см в носовой проход и вращательными движениями набрать клеточный материал со слизистой оболочки.
2. Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.
3. Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
4. Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.
5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
6. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2℃…+8℃ (синий пакет)

В результате возможности субклинической колонизации криптококками носовой полости, положительные результаты исследования биоптатов не указывают с точностью на криптококкоз. Принимая во внимание возможность получения ложноположительных результатов, при ПЦР-диагностике необходимо учитывать результаты цитологического и гистопатологического исследований или бактериологического посева, а также клиническую картину заболевания.

Форма выдачи результата: качественный метод

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Cryptococcus spp.

Список источников:

1. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф.Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.

2. Infection diesases of the dog and cat, Fourth edition, ISBN: 978-1-4160-6130-4 Copyright © 2012, 2006, 1998, 1990 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.

3. Cryptococcosis in cats: ABCD guidelines for prevention and treatment. Maria Grazia Pennisi 1, Catherine Hartmann, Albert Lloret, Luis Ferrer, Diane Addy, Sandor Belak, Corinne Boucro-Baralon, Herman Egberink, Tadeusz Frimus, Tim Gruffudd-Jones, Margaret J. Hosie, Hans Lutz, Fulvio Marsilio, Carinne Marsilio Alan D. Radford, Etienne Thiry, Owe Truyen, Marian C. Horzinek. J Feline Med Surg. 2013 июл; 15 (7): 611-8. DOI: 10.1177 / 1098612X13489224.