Бордетеллез (Bordetella bronchiseptica) (ПЦР)

Бордетеллы – мелкие плеоморфные грамотрицательные коккобациллы, которые передвигаются благодаря наличию ресничек. Bordetella bronchiseptica является одним из патогенов, вызывающих респираторные заболевания собак и кошек повсеместно ( инфекционный трахеобронхит). К инфекции также восприимчивы человек и некоторые другие животные, такие как дикие хищники, свиньи, грызуны.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Существует много штаммов B. bronchiseptica, которые различаются вирулентностью и кругом хозяев. Молекулярное типирование показало, что штаммы, поражающие собак, могут передаваться кошкам, и наоборот. По результатам полного секвенирования генома B. bronchiseptica было установлено наличие плазмид, отвечающих за развитие резистентности к антибиотикам.

Как и вирусные респираторные инфекции, бордетеллез чаще встречается у собак и кошек при скученном содержании в приютах, зоомагазинах и гостиницах для животных. Инфекция B. bronchiseptica часто протекает совместно с респираторными вирусными инфекциями или инфекцией Mycoplasma spp. Bordetella bronchiseptica может сохраняться во внешней среде в течение минимум 10 дней, а также размножаться в естественных водоемах, однако микроорганизм восприимчив к действию большинства дезинфектантов.

Основным путем передачи инфекции B. bronchiseptica является воздушно-капельный, однако возможна передача возбудителя через контаминированные предметы или воду. Микроорганизм характеризуется высокой контагиозностью. При вдыхании B. bronchiseptica прикрепляется к ворсинкам эпителия дыхательных путей и секретирует токсины, вызывающие повреждение респираторного эпителия. Капсула защищает бациллу от фагоцитоза и действия системы комплемента. Инфекция B. bronchiseptica сопровождается нарушением функции клеток, повышенной секрецией слизистого секрета, а также нарушением иммунного барьера, что способствует развитию оппортунистических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженность клинических симптомов болезни может варьировать в зависимости от штамма возбудителя, особенностей иммунного ответа хозяина, а также наличия сопутствующих инфекций. Инкубационный период составляет от двух до десяти дней. Могут наблюдаться ринит и ринотрахеит, серозные и слизисто-гнойные выделения из носа, чихание, хрипы при дыхании и персистирующий тяжелый кашель. У некоторых собак развивается бронхопневмония, характеризующаяся лихорадкой, продуктивным кашлем, летаргией и снижением аппетита.

Выделение B. bronchiseptica инфицированными животными происходит периодически в течение минимум одного месяца, иногда – нескольких месяцев после инфицирования. Персистенция инфекции может быть связана со способностью микроорганизма избегать действия факторов иммунной системы и выживать в фагоцитах.

Исследуемый аналит: жидкость , полученная в результате бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ).

Подготовка пациента: утром перед исследованием животное не кормить. Так как процедура бронхо-альвеолярного лаважа проводится под общей седацией , пациента необходимо подготовить в соответствии с соблюдением всех требований, в зависимости от группы анестезиологического риска . Биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов. Техника взятия должна проводиться с соблюдением правил асептики/антисептики для минимизирования возможной контаминации из верхних дыхательных путей.

Показания: взятие образца у собак, кошек и лошадей во время бронхоскопии, а также для диагностики в тех случаях, когда у животного наблюдается кашель, затрудненное дыхание, выявляются патологические изменения в легких при рентгенографическом исследовании или другие признаки заболевания респираторного тракта;

• при необходимости получения образцов у животных с признаками таких респираторных заболеваний, при которых результат других, менее инвазивных процедур (соскоб эпителиальных клеток из носовой полости) , оказался не информативен.

Противопоказания:

• отсутствие в клинике условий для обеспечения животного дополнительным кислородом в течение нескольких часов после проведения БАЛ;
• исследование противопоказано тем животным, у которых наблюдается затруднение дыхания даже на фоне назначения им кислородотерапии;
• любые противопоказания для проведения общей анестезии.

Метод отбора биоматериала:

Бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ) – это метод получения образца жидкости с диагностической целью из мелких дыхательных путей – альвеол и в некоторых случаях из интерстициальных тканей. Лаваж (смыв) обычно выполняют во время бронхоскопии , что позволяет провести визуальный осмотр дыхательных путей и осуществить прицельный смыв с определенных долей легких. Кроме того, БАЛ можно выполнять и без бронхоскопа. Стерильный физиологический раствор вводят в легкие в достаточном объеме, чтобы он заполнил альвеолы. Затем раствор вместе с клетками и жидкостью с эпителиальной выстилки легких аспирируют обратно.

Преаналитика: 

• провести процедуру взятия бронхоальвеолярного лаважа;
• перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА;
• после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
• заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
• пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
• заполнить направительный бланк, указав код клиента;
• cохранность образца при  -17°С…-23°С 2 недели.

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ БАЛ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация результата: 

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

В ряде случаев при малой концентрации возбудителя в образце возможно получение ложноотрицательных результатов бактериологического посева, в таких ситуациях ПЦР позволяет уточнить диагноз.

«Обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала означает , что найден фрагмент ДНК, специфичный для комплекса Bordetella bronchiseptica, инфицирование B. bronchiseptica. «Не обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных для Bordetella bronchiseptica, или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.

Форма выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Bordetella bronchiseptica.

Литература:

1. Ш.Ваден,Д.Нолл, Ф.Смит,Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.
2. INFECTIOUS DIESEASES OF THE DOG AND CAT, FOURTH EDITION ISBN: 978-1-4160-6130-4 Copyright © 2012, 2006, 1998, 1990 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.
3. Quantitative PCR and Cytology of Bronchoalveolar Lavage Fluid in Dogs with Bordetella bronchiseptica Infection A.M. Canonne F. Billen C. Tual E. Ramery E. Roels I. Peters C. Clercx First published: 27 July 2016 https://doi.org/10.1111/jvim.14366 Cited by: 4