Исследование на уровень кобаламина (цианкобаламина, витамина В12)

Кобаламин представляет собой кобальт-содержащий водорастворимый витамин, который является важным кофактором в различных биохимических реакциях. Кобаламин синтезируется только бактериями и археями.

Высвобождающийся в кислой среде из пищевых продуктов витамин В12 связывается с белками, которые транспортируют кобаламин и способствуют его абсорбции. Первоначально в желудке витамин В12 транспортируется R-белком ‒ гаптокоррином, выделяемым слюнными железами и фундальными клетками желудка. В проксимальном отделе тонкого кишечника гаптокоррин разрушается под воздействием панкреатического трипсина. Затем кобаламин соединяется с внутренним фактором Кастла, который секретируется поджелудочной железой у собак и кошек и клетками слизистой оболочки желудка (мукоцитами) у собак. Этот лабильный комплекс устойчив к действию пищеварительных ферментов и свободно проходит до дистального отдела подвздошной кишки, где связывается со специфическими рецепторами эндоцитоза (кубилином) на щеточной каемке и поглощается энтероцитами. Кобаламин, который не находится в комплексе с внутренним фактором, плохо поглощается клетками кишечника, даже если он содержится в больших концентрациях. Разрушение комплекса протеолитическими ферментами энтероцитов приводит к высвобождению витамина В12, который далее связывается с внутриклеточным транскобаламином II (TcII). Затем рецептор к TcII переносит комплекс TcII‒витамин В12 в кровеносное русло, откуда он путем эндоцитоза захватывается клетками печени и другими тканями. Из печени вместе с желчью витамин В12 снова поступает в просвет кишечника. Таким образом осуществляется его энтерогепатическая рециркуляция.

Кобаламин транспортируется в плазме крови одним из трех известных транспортных белков: транскобаламином I, II или III. Витамин В12, связанный с транскобаламином II, быстро захватывается клетками, период его полуциркуляции составляет около одного часа. В случае, когда витамин В12 связан с транскобаламином I, его переход из крови в ткани занимает несколько дней. Одним их источников ТсI являются лейкоциты. Излишки витамина В12 депонируются в печени либо выводятся из организма естественным путем (с мочой и фекалиями).

Нарушения образования R-белков или внутреннего фактора (например, при воспалительных заболеваниях, повреждающих подвздошную кишку, или чрезмерном росте кишечной микрофлоры) влияют на концентрацию кобаламина. При чрезмерном росте бактериальной микрофлоры создается конкуренция за витамин В12 между хозяином и бактериями. При этом бактериальные токсины, протеазы, другие метаболиты связывают витамин В12, что влияет на его усвоение.

Кишечные бактерии также могут быть источником витамина В12. У жвачных животных витамин B12 в достаточном количестве синтезируется с помощью бактерий, находящихся в рубце. Поскольку поджелудочная железа является продуцентом внутреннего фактора, то при эндокринной недостаточности поджелудочной железы (ЭНПЖ) наблюдается дефицит кобаламина у собак и кошек.

Поскольку дефицит В12 косвенно ингибирует синтез нуклеиновых кислот и таким образом влияет на быстро делящиеся клеточные популяции, выраженная гипокобаламинемия может привести к атрофии кишечных крипт и мальабсорбции.

Симптомы дефицита как витамина B12, так и фолиевой кислоты включают макроцитарную анемию, причиной которой является нехватка в клетках фолиевой кислоты в условиях недостаточности витамина В12. В следствие этого происходит замедление деления клеток из-за снижения синтеза инозинтрифосфата (ИТФ) и пуриновых нуклеотидов, уменьшение синтеза тимидилмонофосфата (ТМФ) и ДНК. Продолжительный дефицит витамина В12 может привести к серьезным неврологическим расстройствам (например, дегенерации миелиновой оболочки).

Ингибирование синтеза нуклеиновых кислот при дефиците кобаламина заметно сказывается на процессе гемопоэза у взрослых животных. Ингибирование ядерного созревания обычно приводит к нерегенеративной анемии с появлением мегалобластоза, нейтропении и гиперсегментации нейтрофилов.

Определение концентрации витамина В12 в сыворотке крови является самым ранним показателем дефицита кобаламина.

Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.

Преаналитика:

1. Взятие крови – пробирка с красной крышкой без геля.

2. Осторожно перевернуть пробирку 4-6 раз.

3. Пробирку оставить в вертикальном положении на 30 минут при комнатной температуре.

4. Центрифугировать при 2000 g. в течение 10 минут, не позднее 60 минут после взятия.

5. Сразу перенести сыворотку в пустую чистую пробирку с белой крышкой.

6. Стабильность пробы: 5 дней при +2°С…+8°С; 6 недель при -17°С…-23°С.

7. Минимальный объем крови для выполнения 3 тестов – 2,5 мл.

8. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк,

указав код клиента.

9. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Единицы измерения в лаборатории VET UNION: пг/мл.

Референсные значения:

• Собаки: 252-908 пг/мл.
• Кошки: 290-1500 пг/мл.

Содержание кобаламина в готовых кормах для собак и кошек, как правило, находится в избытке, что делает алиментарную недостаточность этого витамина маловероятной. Поглощение кобаламина из тонкого отдела кишечника зависит от нескольких факторов, и показатель его уровня в крови может быть использован в качестве косвенного маркера желудочно-кишечных заболеваний. Сывороточная концентрация кобаламина может дать информацию о месте и причине заболевания желудочно-кишечного тракта.
Хотя у приматов с дефицитом кобаламина развивается макроцитарная анемия, у собак, грызунов, лошадей, свиней и жвачных животных в таких случаях развивается нормоцитарная нормохромная анемия. У собак при дефиците кобаламина в крови присутствуют большие и малые эритроциты. Это приводит к увеличению ширины распределения эритроцитов по объему (RDW), но средний объем клеток остается в пределах референсных значений.

Избыточный бактериальный рост в тонком кишечнике не является клиническим состоянием, которое обычно отмечается у кошек, но концентрация кобаламина в сыворотке крови может снижаться за счет связывания витамина кишечными бактериями. У кошек низкая концентрация сывороточного кобаламина наиболее часто ассоциируется с заболеванием тонкого отдела кишечника, если экзокринная недостаточность поджелудочной железы (ЭНПЖ) предварительно была исключена.

У собак с субнормальной концентрацией сывороточного кобаламина следует провести тест на трипсиноподобную иммунореактивность (TLI) для исключения ЭНПЖ. Субнормальные концентрации сывороточного кобаламина могут стать причиной заболеваний желудочно-кишечного тракта и привести к системным осложнениям (то есть иммунодефициту, центральным или периферическим неврологическим расстройствам, редко к анемии). В таком случае пациенты должны получать кобаламин парентерально. Дефицит кобаламина на клеточном уровне может возникнуть, даже когда концентрация сывороточного кобаламина находится на нижней границе нормального значения (< 350 нг/л). В этом случае также показан пероральный прием кобаламина.

Наследственная селективная мальабсорбция кобаламина у ризеншнауцеров имеет аутосомно-рецессивный механизм наследования и связана с отсутствием рецепторов (т. е. кубилина) для комплекса внутреннего фактора с кобаламином на щеточной каемке микроворсинок тонкого кишечника и эпителиальных клеток почечных канальцев.

Повышение уровня:

Может возникнуть при парентеральном введении кобаламина или в результате повреждения паренхимы печени, поскольку гепатоциты депонируют кобаламин.
Клиническое значение повышения концентрации кобаламина в сыворотке крови у собак и кошек неизвестно.

Понижение уровня:

• Тяжелое заболевание тонкого отдела кишечника (например, воспалительное заболевание кишечника) уменьшает поглощение кобаламина (заболевание кишечника, ограничивающееся подвздошной кишкой, встречается редко).
• Избыточный рост бактериальной микрофлоры в тонком кишечнике.
• Экзокринная недостаточность поджелудочной железы. В результате возникает недостаток ферментов поджелудочной железы, который приводит к неспособности освободить кобаламин от гаптокоррина, снижению продукции внутреннего фактора Кастла и вторичному избыточному бактериальному росту в тонком кишечнике.
• Хирургическое удаление подвздошной кишки.
• Наследственные дефекты абсорбции кобаламина (у ризеншнауцеров).
• Желудочно-кишечные заболевания у кошек часто сопровождаются гипокобаламинемией.