Посев на грибы рода Candida с определением чувствительности к антимикотическим препаратам

Кандидоз – микоз, вызванный грибами рода Candida. C. albicans – диплоидный грибок (молочница) форма дрожжеподобных грибов, способных к спариванию, но не в форме мейоза, является наиболее распространенным видом дрожжей, вызывающих инвазию у животных. В роду Candida насчитывается более 200 видов. Эти грибы входят в состав нормальной флоры слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, носовой полости и половых органов млекопитающих. У гусей, индеек чаще инфицирует клоаку и воздухоносные пути, у коров вызывает снижение плодовитости, аборты, маститы, у кобыл приводит к развитию пиометры, у кошек к циститам и пиотораксу, и также, как и у лошадей, к заболеванию глаз, у собак, телят, свиней и кошек встречается генерализованная форма заболевания.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Развитию кандидоза способствуют длительное лечение антибиотиками, иммуносупрессивная терапия, понижение клеточного иммунитета любой этиологии, инфицированность вирусом иммунодефицита или лейкоза, нейтропения (у собак), сахарный диабет, парвовирусная инфекция, длительное применение глюкокортикоидов, повреждение слизистой оболочки или кожного покрова.Также в анамнезе у пациентов с кандидозом ожоги, травмы, оперативное вмешательство, постоянный катетер. Симптомы заболевания различаются в зависимости от особенностей, локализации или диссеминации возбудителя. При локализации возбудителя в ротовой полости, обнаруживают белые пораженные участки на языке, слизистой оболочке, губах, кожно-слизистой кайме; при локализации в кишечнике – хроническую диарею, похудение. Поражение уха проявляется воспалением наружного слухового прохода и/или средним отитом, гениталий-белыми выделениями из влагалища или препуция, кожного покрова – незаживающим эритематозным мокнущим изъязвлением. Симптоматика системного кандидоза зависит от места образования микроабсцессов и может включать лихорадку, дерматит, передний увеит, плевральный выпот, остеомиелит, диарею, расстройства функций ствола мозга или мозжечка.

Кандидоз следует дифференцировать с другими инфекционными болезнями ротовой полости (бластомикозом, гистоплазмозом, вирусными болезнями кошек и др.), эзофагитом, острым или хроническим пищеводным рефлюксом и рвотой, последствиями травмы или внедрения чужеродного тела. Системный кандидоз дифференцируют с бактериальным сепсисом или токсемией, другими системными микозами, аутоиммунными болезнями, аллергическим дерматозом, вирусными инфекциями, новообразованиями, выраженными нарушениями метаболизма и анафилаксией.

При диссеминированных формах кандидоза развиваются обширные поражения внутренних органов, представленные множественными белыми очагами в сердце, печени, селезенке и других органах в зависимости от хода эмболизации. При микроскопическом исследовании эти очаги определяют как абсцессы или участки некроза, содержащие бластоконидии, псевдогифы и настоящие гифы.

Для подтверждения диагноза могут понадобиться соскоб или биопсия кожи. Выделение Candida spp. из фекалий обычно недостоверно, в то время как из мочи более вероятно, чем из крови, поскольку при диссеминированных формах болезни часто наблюдается эмболизация почек. Лучше брать артериальную кровь для бактериологического исследования.

Растет Candida albicans в аэробных условиях при 37℃ на широком спектре питательных сред, в том числе на Сабуро декстрозном агаре. Образует выпуклые колонии от белого до бежевого и кремового цветов на поверхности селективной среды. Главными признаками для идентификации являются образование "ростковой трубки" и/или псевдомицелия и хламидоспоры.

Исследуемый аналит: аспират лимфоузла, эндоскопические выщипы, содержимое гигромы/серомы, слизистая оболочка мочевого пузыря, биоптат кожи, раневое отделяемое с кожи и с поверхности раны при оперативном вмешательстве, мазок с поверхности кости при установке металлоконструкций, центральный венозный катетер (после извлечения из полости сосуда).

Метод исследования: микологический, бактериоскопический.

Показания: лимфаденит, сепсис, воспалительный или неопластический процесс в органах брюшной полости, хронический рецидивирующий цистит, некроз слизистой оболочки мочевого пузыря, незаживающие раны и переломы после травм, флебит на месте длительно установленного венозного катетера, дерматиты в качестве дополнительного рекомендуемого теста к AN474–А или 474–Р у животных в анамнезе у которых длительная терапия антибиотиками и иммуносупрессивными препаратами.

Противопоказания: только в случае наличия таковых, при применении общей анестезии (на усмотрение анестезиолога) для проведения процедуры.

Подготовка пациента: перед проведением седации требуется голодная диета 6-12 часов. Отменить применение системных и местных антибактериальных средств за 7 дней до проведения анализа.

Метод отбора: цистоцентез или цистотомия, punch-биопсия кожи, эндоскопическое исследование, мазок с поверхности раны с помощью зонда.

Преаналитика:

1. все манипуляции проводятся с соблюдением правил асептики/антисептики во избежание контаминации пробы бактериями с кожного покрова;
2. аспират лимфоузла: размером не более 0,1 см поместить в жидкую среду Amies (Эймс) в количестве не более 3 штук;
3. эндоскопический выщип: биоптат, взятый на границе здоровой и пораженной ткани, размером не более 0,3 см, поместить в жидкую среду Amies (Эймс) в количестве не более 1 штуки;
4. содержимое гигромы/серомы: перенести полученную жидкость, объемом не более 0,3 мл в транспортную среду Amies (Эймс);
5. слизистая оболочка мочевого пузыря: биоптат слизистой оболочки, взятой интраоперационно, размером не более 0,3 см, поместить в жидкую среду Amies (Эймс). Возможно взятие соскоба клеток со слизистой оболочки непосредственно тампоном на аппликаторе (ESwab) от транспортной системы Amies (Эймс) при цистотомии;
6. раневое отделяемое с кожи: при наличии гнойного отделяемого предварительно убрать при помощи марлевой салфетки, смоченной стерильным физиологическим раствором (0,9%-ным). При помощи тампона на аппликаторе (ESwab) провести взятие клеточного материала с кожи на границе здоровой и пораженной ткани. Поместить тампон с аппликатором в жидкую среду Amies (Эймс);
7. биоптат кожи: размером не более 0,3 см поместить в жидкую транспортную среду Amies (Эймс) в количестве 1 штуки. Опустить тампон на аппликаторе (ESwab) от транспортной системы Amies (Эймс) в полученную рану, вращательными движениями провести взятие клеточного материала и поместить тампон на зонде в жидкую транспортную среду Amies (Эймс);
8. при взятии любого биоматериала: поместить тампон на аппликаторе (ESwab) в жидкую среду Amies (Эймс), даже если он не использовался. Отломить в красной линии надлома, закрыть оранжевой крышкой;
9. контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента и обязательно время отбора пробы!
10. температурный режим хранения и транспортировки +2℃...+8℃ в течение 48 часов.

Единицы измерения: КОЕ/тамп.

Форма выдачи результата: в результате даётся информация:

1. об отсутствии или наличии роста;
2. о количестве выросших в посеве грибов рода Candida;
3. о видовой принадлежности;
4. о чувствительности к антимикотическим препаратам (если количество более 10* 1 КОЕ/тампон).

В случае отсутствия роста грибов выдается формулировка результата: «Роста Candida spp. не выявлено».

Список источников:

1. Concise Review of Veterinary Microbiology. Second Edition. P.J. Quinn, B.K. Markey, F.C. Leonard, E.S. FitzPatrick, S. Fanning;
2. Veterinary Microbiology and Microbial Disease. Second Edition. P. J. Quinn, B.K. Markey, F. C. Leonard, E. S. Fitz Patric, S. Fanning, P. J. Hartigan.
3. Болезни кошек и собак: справ; (пер. с англ.). Л. Тилли, Ф. Смит мл.. 2010 г.