Эрлихиоз (E. canis) (ПЦР)

Ehrlichia canis основная причина возникновения у собак моноцитарного эрлихиоза МЭС (canine monocytic ehrlichiosis, CME). E. canis паразитирует в плазме моноцитов, образуя морулы.

1. Преаналитика
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

К настоящему времени на основании генетического анализа выделено три штамма Е.canis (Florida stain (Gen Bank accession No M73226), Oklahoma strain /M73221/, Israeli strain (U26740), имеющих различные генетические характеристики и дающих рост на DH82 клеточной линии. МЭС распространен на всех континентах, исключение составляет Австралия. В природе жизненный цикл Е.canis поддерживают постоянно зараженные позвоночные хозяева и клещи-переносчики. Основной переносчик МЭС собачий клещ Rhipicephalus sanguineus, который служит долговременным хранителем патогена. Заболевание носит ярко выраженный сезонный характер, который сопряжен с усилением активности клещей переносчиков в теплое время года. МЭС болеют все породы собак, наиболее серьезные последствия от инфицирования регистрируются у немецких овчарок.

Животные заражаются в процессе паразитирования клещей, получая возбудителя с их слюной.

Заболевание протекает в острой, подострой и хронической форме. Для острой фазы характерно внедрение патогена в моноциты крови с последующей репликацией и локализацией в мононуклеарные фагоцитарные клетки селезенки, печени и лимфатических узлов. Для хронической формы наиболее характерны диссеминация в эндотелиальные клетки других органов и развитие васкулита. В патогенезе заболевания участвуют иммунные механизмы. Иммунопатологическая форма проявляется в появлении антитромбоцитарных антител и гипергаммаглобулинемии. Серьезную опасность представляет субклиническая форма эрлихиоза, так как ее течение не ограничивается определенными сроками и при иммуносупрессивном состоянии переходит в хроническую. Причина гибели животных при МЭС, как правило, массированные кровотечения.

У животых, в анамнезе которых, как правило, наползание либо присасывание клещей отмечают следующие признаки заболевания. Инкубационный период при МЭС составляет от 1 до 3 недель и характеризуется развитием лихорадки с четко выраженной лимфоаденомегалией и спленомегалией. В дальнейшем отмечают кровотечения (петехии, экхимозы кожи и слизистых). У больных собак может отмечаться рвота, гнойно-катаральный ринит, хромота, атаксия и одышка. Острая форма может закончиться выздоровлением, либо перейти в субклиническую с последующим переходом в хроническую. При хроническом протекании болезни наблюдаются следующие, наиболее типичные клинические проявления: общая слабость, депрессия, потеря аппетита, потеря веса, усталость, бледные слизистые оболочки, лихорадка, гепатомегалия, отеки задних лап и мошонки. Хроническое развитие болезни часто приводит к репродуктивным расстройствам (аномально длинный эстральный цикл, аборты, неонатальная смерть). У животных отмечают менингоэнцефалиты, вызванные васкулитом и периваскулярными инфильтратами в мозговых оболочках. Отмечают помутнение роговицы, передний увеит, фокальные хориоретинальные очаги, субретинальные геморрагии.МЭС следует дифференцировать от гранулоцитарного анаплазмоза, болезни Лайма, гепатозооноза, чумы плотоядных.

Диагностика МЭС основана на данных анамнеза, истории болезни, клинических и эпизоотологических обследований. Решающую роль в подтверждении диагноза играют результаты лабораторных исследований, среди которых наиболее предпочтительна иммунофлюоресценция (IFA) сыворотки крови. Титры выше 1:40/1:100 служат показателем инфекции в целом. При остром протекании заболевания серологические титры могут достигать очень высоких значений: от 1:5120 до 1:10240 или более в течение 8 недель после заражения.

Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени» исследуют гомогенизат костного мозга для качественного определения ДНК Е.canis.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Показания:

• скрининг – тест для выявления инфекции на хронических стадиях, вызванной Е.canis у собак после пребывания на эндемичных территориях;
• дифференциальный диагноз на гранулоцитарный анаплазмоз, болезнь Лайма, гепатозооноз, чуму плотоядных;
• обследование животных с симптомами заболевания или при подозрении на заражение.

Противопоказания: непереносимость препаратов для местного обезболивания и противопоказания к общей анестезии, согласно протоколу оценки степеней риска.

Метод отбора: пункция костного мозга.

Преаналитика:

1. Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).
2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).
3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.
6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента. 
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Диапазоном нормальных значений считается отрицательный результат.

Форма выдачи результата: качественный, с указанием наличия/отсутствия ДНК возбудителя

Список источников:

1. Saito TB, Walker DH. Ehrlichioses: An Important One Health Opportunity. Vet Sci. 2016 Aug 31; 3(3). pii: E20. doi: 10.3390/vetsci3030020. Review.
2. Mathios E. Mylonakisa, Shimon Harrusb, Edward B. Breitschwerdt An update on the treatment of canine monocytic ehrlichiosis (Ehrlichia canis) The Veterinary Journal, 246 (2019), pii. 45-53. doi: 10.1016/j.tvjl.2019.01.015. Review.