Бабезиоз (пироплазмоз) (Babesia spp.) (ПЦР)

Простейшие паразиты Babesia spp. (семейство Babesiidae) поражают эритроциты домашних и диких животных и вызывают заболевание бабезиоз, клинические проявления которого зависят от вида и штамма бабезий, а также от возраста, иммунного статуса и наличия сопутствующих инфекций или других заболеваний зараженного животного.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Традиционно с использованием микроскопического исследования мазка крови выделяли крупные и мелкие бабезии. В настоящее время к представителям крупных бабезий относят B. canis, Babesia rossi, Babesia vogeli, Babesia bigemina. К группе мелких бабезий, имеющих клиническое значение, относят три вида B. gibsoni, Babesia conradae и «Babesia vulpes». В Евразии причиной заболевания бабезиозами служат B. canis, B. vogeli (крупные бабезии), B. microti-like sp. и B. gibsoni (мелкие бабезии). Географическое распространение Babesia spp. напрямую связано с распространением иксодовых клещей (Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus turanicus, Dermatocentor reticulatus, Haemaphysalis eliptica), основных компетентных переносчиков заболевания. Исключением является Babesia gibsoni, которая может передаваться со слюной во время повреждения кожных покровов. Выявлена породная предрасположенность немецких овчарок к B. canis. Показано, что молодые собаки более склонны к развитию тяжелого бабезиоза при заражении B. canis, B. vogeli или B. rossi. Эта же зависимость отмечена в случае заражения взрослых охотничьих собак B. microti-like sp.

Бабезиоз кошек изучен недостаточно. Известно, что кошки заражаются малыми бабезиями, включая Babesia felis, B. cati и B. leo. Инфекция обычно встречается у животных в возрасте до трех лет, породной или половой предрасположенности не наблюдается. Описаны единичные случаи, когда представители группы больших бабезий вызывали болезни у кошек.

Жизненный цикл бабезий в организме теплокровных протекает в эритроцитах, что приводит к их разрушению за счет образования дочерних форм паразита и освоению новых эритроцитов. Гемолитическая анемия и тромбоцитопения (иммуннообусловленные нарушения) в процессе развития инфекции появляются в результате опсонизации собственными антителами здоровых клеток крови с прикрепленными к ним растворимыми антигенами бабезий.

На характер клинической картины при бабезиозе оказывают влияние наличие коинфекций других трансмиссивных заболеваний и штамм микроорганизма. У собак при бабезиозе основными клиническими признаками являются лихорадка, анорексия, летаргия, слабость, спленомегалия. Лабораторные изменения картины крови включают тромбоцитопению, гемолитическую анемию. В начале заболевания возможна лейкопения, однако по мере развития осложнений, картина белой крови меняется в сторону значительного лейкоцитоза. Изменение цвета мочи с соломенного (в норме) до бурого связано с гемоглобинурией. В случае тяжелой формы бабезиоза возможно развитие острой почечной недостаточности, дисфункции ЦНС, коагулопатии (ДВС), гепатопатии с развитием желтухи, шок. У кошек при бабезиозе наблюдаются летаргия, анорексия, слабость, выраженная анемия, являющаяся причиной других клинических симптомов, диарея. Лихорадка и желтуха являются менее распространенными симптомами. Заболевание часто протекает в хронической форме, клинические признаки могут отсутствовать до достижения поздней стадии. У кошек отмечается адаптация к анемии, и клинические проявления, связанные с анемией, бывают выражены слабо до стрессовой ситуации, например, до осмотра или диагностического обследования. Осложнения, наблюдаемые при гемолитической анемии, включают гепатопатию, отек легких, почечную недостаточность, неврологические симптомы, развитие вторичных инфекций.

Ввиду того, что частота встречаемости бабезий в мазках крови может варьировать, ПЦР наиболее чувствительный и специфичный инструмент диагностики. ДНК бабезий выявляют в образцах крови. В целях скрининговых исследований используют тест-системы, детектирующие ДНК без выявления вида возбудителя. При необходимости можно провести идентификацию паразита до вида с помощью секвенирования.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: ПЦР- Real-time.

Подготовка пациента: небольшой дискомфорт, который может возникнуть при данной манипуляции, рекомендуется устранять путем введения препаратов для местной анестезии, сильнодействующих препаратов или с помощью общей анестезии легкой степени.

Перед проведением аспирации шерстный покров сбривают, кожу обрабатывают антисептическим раствором.

Показания: анемия (обычно регенеративная), тромбоцитопения, гиперглобулинемия, спленомегалия, желтуха и пигментурия.

Противопоказания: непереносимость препаратов для местного обезболивания и противопоказания к общей анестезии, согласно протоколу оценки степеней риска.

Метод отбора биоматериала: аспирация костного мозга.

Преаналитика: 

1. Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).

2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.    

7. Сохранность образца при -17°С…-23°С 2 недели.

8. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ 

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Babesia spp.

Использованная литература:

1. Alvarado-Rybak M, Solano-Gallego L, Millán J. A review of piroplasmid infections in wild carnivores worldwide: importance for domestic animal health and wildlife conservation.
   Parasit Vectors. 2016 Oct 10;9(1):538
2. Solano-Gallego L, Sainz Á, Roura X, Estrada-Peña A, Miró G.A review of canine babesiosis: the European perspective. Parasit Vectors. 2016 Jun 11;9(1):336. doi: 10.1186/s13071-016-1596-0
3. Beugnet F, Moreau Y.Babesiosis.Rev Sci Tech. 2015 Aug;34(2):627-39. Review.