Бруцеллез (Brucella spp.) (ПЦР)

Возбудителем бруцеллеза собак является Brucella canis – маленькая грамотрицательная неспорообразующая коккобацилла. В редких случаях бруцеллез собак могут вызывать Brucella abortus, Brucella melitensis и Brucella suis.

Среди инфекций собак, передаваемых половым путем, бруцеллез имеет наибольшее ветеринарное значение. Brucella canis вызывает бесплодие у кобелей и сук. Скрининговые исследования на наличие инфекции B. canis являются важной частью обследования собак перед использованием в разведении.

Исследование на бруцеллез должно проводиться при абортах, орхите, эпидидимите и бесплодии. Возможно заражение кастрированных сук и сук, которые не были вязаны. Инфекция B. canis также может протекать в форме системной болезни (например, дискоспондилита). Обычно заболевание поражает собак средних и крупных пород с массой тела от 14 до 64 кг, в возрасте от одного года до восьми лет. Передача инфекции B. canis происходит при контакте с биологическими жидкостями больных особей, содержащими достаточное количество бактерий (2 × 10 6 КОЕ), спермой, лохиями, абортированными плодами/плацентой и мочой.

Основными путями передачи являются оральный и назальный, вторичным – половой (через слизистые оболочки). Воздушно-капельный путь передачи особенно актуален в питомниках при скученном содержании собак. Также возможна трансплацентарная и чрескожная передача инфекции. Хотя передача инфекции через предметы ухода возможна при определенных условиях, B. canis неустойчива к действию факторов окружающей среды и быстро инактивируется стандартными дезинфектантами, содержащими четвертичный аммоний, 1%-ым гипохлоритом натрия, 70%-ым этанолом, растворами йода и глутаральдегидом.

Естественными резервуарами B. canis являются представители семейства собачьи. Бруцеллез собак обычно наблюдается в форме вспышек в крупных питомниках, редко — у собак частных владельцев.

Бруцеллы способны прикрепляться и проникать через слизистые оболочки, после чего происходит их деление в регионарных лимфатических узлах. Бактериемия наблюдается в течение 7-30 дней после инфицирования, при этом идет распространение возбудителя в клетки ретикулоэндотелиальной системы, предстательную железу, матку и плаценту. B. canis обладает тропностью к стероид-зависимым тканям репродуктивной системы. Иногда бруцеллы могут выживать и размножаться в моноцитах и макрофагах ретикулоэндотелиальной системы благодаря ингибированию миелопероксидазы бактерицидной системы. На ранних стадиях инфекции полиморфонуклеарные клетки уничтожают B. canis сравнительно малоэффективно. Бруцеллы обнаруживаются в эндоплазматическом ретикулуме трофобластных клеток у инфицированных беременных сук. Гибель плодов при этом происходит в результате тяжелого некротизирующего плацентита, коагулирующего некроза ворсинок хориона и некротизирующего артериита. Бруцеллы обнаруживаются в желудочном содержимом абортированных плодов. Некротизирующий васкулит и гранулематозное воспаление вызывают патологии семенников, придатков семенников и предстательной железы.

Бруцеллез у собак характеризуется тяжелыми осложнениями при низком уровне смертности.

Клинические проявления бруцеллеза обычно слабо выражены и включают пониженную работоспособность, поясничные боли, хромоту, снижение массы тела и летаргию.

Основным признаком бруцеллеза у беременных сук является смерть плодов, которая может наблюдаться на ранних стадиях беременности (20-ый день), при этом происходит резорбция плодов, либо чаще (75% случаев) на более поздних сроках – до 59-го дня, при этом наблюдаются аборты. У сук, у которых произошла гибель плодов на ранних сроках беременности, может быть неверно диагностировано бесплодие, если до этого не проводилось ультразвуковое исследование для подтверждения беременности.

У кобелей при бруцеллезе происходит нарушение процессов созревания, транспорта и хранения сперматозоидов. Часто наблюдаются эпидидимит, орхит и снижение качества спермы. В хронических случаях происходит атрофия семенников и развитие бесплодия. Бруцеллы при этом обнаруживаются в предстательной железе и уретре и периодически выводятся с мочой. В развитии бесплодия играет роль также образование антител к сперме. Через 3-4 месяца после инфицирования может наблюдаться пиоспермия. При хронических инфекциях у собак обоих полов могут отмечаться увеит или эндофтальмит, лимфаденит, спленомегалия или дискоспондилит; в некоторых случаях – дерматит и менингоэнцефалит. Бактериемия может персистировать в течение нескольких лет, и собаки с субклинической формой болезни остаются источниками инфекции длительное время.

Значительное количество бруцелл содержится в выделениях из влагалища в течение 4-6 недель после аборта. У кобелей наивысшая концентрация микроорганизмов в сперме наблюдается через 2-3 месяца после инфицирования, в течение последующих нескольких лет происходит снижение концентрации. В моче бруцеллы могут обнаруживаться на протяжении нескольких месяцев или лет, чаще у кобелей. Также возможно выделение бруцелл с молоком. Иногда в течение 1-5 лет может происходить спонтанное излечение, однако точно установить факт элиминации возбудителя достаточно сложно. Суки, получавшие антимикробные препараты, могут приносить нормальное потомство после множественных абортов, оставаясь при этом источником инфекции.

Диагноз при бруцеллезе собак ставится на основании клинических симптомов, результатов серологического исследования, бактериологического посева образцов крови, мочи и тканей, гистопатологического исследования и ПЦР. Поскольку ни один из методов прижизненной диагностики не обладает 100%-ой чувствительностью, а серологические методы исследования отличаются недостаточной специфичностью, обычно для постановки диагноза необходимо учитывать результаты ряда исследований. При наличии в питомнике нескольких собак с бесплодием необходимо проведение серологического исследования и бактериологического посева образцов крови от как можно большего числа собак для повышения точности диагноза.

ПЦР используется для обнаружения B. canis в сперме собак с отрицательным результатом бактериологического посева; этот метод, вероятно, является одним из наиболее чувствительных при проведении обследования животных, используемых в разведении. Также для проведения ПЦР используются образцы водянистой влаги от собак с эндофтальмитом и аспираты из лимфоузлов. Существуют тест-системы ПЦР, позволяющие дифференцировать виды бруцелл. Для обнаружения B. canis в образцах ткани, мочи, лейкотромбоцитарном слое и ткани межпозвонкового диска от собак с дискоспондилитом используется ПЦР в реальном времени.

Исследуемый аналит: цельная кровь.

Метод исследования: полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Подготовка пациента: биоматериал отбирается для исследования до применения системных антибактериальных препаратов.

Показания: апатия, снижение массы тела, хромота, нарушения развития плодов у сук, аборты.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика:

1. Провести процедуру взятия крови.

2. После внесения биоматериала в пробирку с сиреневой крышкой (К3 ЭДТА) осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

3. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного.

5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

6. Сохранность образца 2 недели при -17°С…-23°С.

7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

Минимальный объем крови для выполнения исследования – 1 мл.

Интерпретация результата: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК специфичного для Brucella canis.