Неоспороз (Neospora caninum) (ПЦР)

Неоспороз- паразитарная болезнь, вызываемая простейшим Neosporum caninum. Это недавно идентифицированное простейшее из группы кокцидий. Впервые описана в Норвегии. Относится к типу - Апикомплекса, к классу - Споровики, подклассу- Кокцидии, роду- Неоспора. 

Neosporum caninum – внутриклеточный паразит, поражающий многие органы животных. Болезнь обусловлена некрозом тканей, который возникает при разрыве цист и инвазии тахизоитами.

Постоянными хозяевами являются собаки, волки, койоты. Промежуточные хозяева– альпака, антилопа, пятнистый олень, чернохвостый олень, крупный рогатый скот, собаки (как постоянный и промежуточный хозяин), олень-лира, лошадиные, козы, овцы, ламы, лесная куница, носороговые и др. 

Стадии развития паразита:

1. Ооцисты – стадия паразита, которая выделяется постоянным хозяином во внешнюю среду. Выживает от нескольких месяцев до нескольких лет. 
   
2. Тахизоиты – быстроделящаяся фаза. Распространяются в межклеточном пространстве, жидкостях, паразитических вакуолях внутри клетки. Эта стадия паразита отвечает за клиническую симптоматику.
   
3. Брадизоиты – медленноделящаяся стадия, в результате ее образуются тканевые цисты с толстой стенкой. Эта стадия наступает после иммунного ответа со стороны хозяина. Цисты локализуются чаще в мышцах и ЦНС. В одной тканевой цисте могут находиться от 20-100 брадизоитов. Выживают при температуре +4 ℃ более 14 дней. Устойчивы к пепсину и трипсину.
   

Половая стадия – только в организме собаки, в результате чего образуется зигота ( до 1 млн.) , которая выделяется во внешнюю среду с калом, за 1-5 дней происходит ее споруляция . Спороцисты содержат четыре спорозоита. Далее может происходить диссеминация по пастбищам, водоемам, в итоге так происходит заражение животных, а также при непосредственном поедании кала (собаки). Спора после проглатывания попадает в желудочно-кишечный тракт, в толще 12-ти перстной кишки разрушается стенка споры, спорозоиты выходят в просвет тонкого отдела кишечника, мигрируют в ее стенку, где происходит их трансформация в тахизоиты. Они начинают активно делиться в стенке кишки, в результате чего развивается энтерит. Продолжают размножаться в крупных сосудах и в итоге, попадают в различные органы и ткани. Чаще всего мигрируют в матку. Существует вертикальный путь передачи паразита (через беременную матку и с молоком детенышам в кишечник).

Ткани, в которых образуются тахизоиты: матка, ЦНС, клетки эндотелия сосудов, миоциты, гепатоциты, клетки почек, альвеолярные макрофаги. Внутри клетки паразит прикрепляется, использует структуры клетки (митохондрии и др.) для своей жизнедеятельности. Быстро размножается, в итоге происходит гибель клетки, быстрое заражение новых . Обычно это длится примерно 5 дней, далее активизируется иммунитет промежуточного хозяина, и паразит переходит в медленноделящуюся стадию-брадизоиты. Они окружаются толстой стенкой, и таким образом могут долго находиться в промежуточном хозяине до тех пор, пока хозяина съедят или при иммуносупрессии (препараты, беременность, заболевания), тогда они выходят из тканевой цисты и снова превращаются в тахизоиты.

Брадизоиты в организм постоянного хозяина попадают с мясом , далее они либо превращаются в гаметы (половой цикл развития) с образованием ооцист, либо мигрируют в стенку кишечника, где превращаются в тахизоиты и разносятся по всему организму по крупным сосудам в различные органы.

 Клинические признаки:

• Чаще бессимптомное течение у взрослых животных;
  
• Тяжело протекает у щенков до 6 месяцев;
  
• Тяжело протекает у щенков до 6 месяцев;
  

При отсутствии лечения: слабость мышц шеи, дисфагия, мегаэзофагус, смерть. Также у щенков может быть диарея, нарушение координации, некротическая и гнойная бронхопневмония, фиброзно-геморрагический энтерит, миокардит, негнойный энцефалит, поражение кожи. У собак старше 6 месяцев развиваются симптомы : возможна реактивация хронической инфекции, полимозит, миокардит, менингоэнцефаломиелит, дерматит, пневмония, диффузный перитонит. У сук реактивация может быть связана с беременностью. 

Дифференциальная диагностика: у молодых собак болезнь дифференцируют от других многоочаговых поражений периферических нервов, токсоплазмоза, чумы собак и прогрессирующего полирадикуломиозита. Другие диффузные поражения моторных нейронов и мышц у молодых собак встречаются редко. У старых собак с симптомами поражения ЦНС неоспороз дифференцируют от других инфекционных заболеваний (микозов, бешенства, псевдобешенства), отравлений (свинцом, фосфорорганическими соединениями, карбаматами, гипохлоритом, стрихнином), энцефалита, менингита, гранулематозного менингоэнцефалита и нарушений обмена веществ (гипогликемии, печеночной энцефалопатии). 

Лабораторная диагностика: результаты клинического и биохимического анализов крови и мочи варьируют в зависимости от вовлеченных в процесс органов. По общеклиническому крови наблюдаются легкая нерегенеративная анемия, умеренная эозинофилия, моноцитоз, недегенеративные нейтрофилы. При повреждении мышц может быть повышена активность креатинфосфокиназы, аспартатаминотрансферазы и гиперглобулинемия . Так же для диагностики неоспороза применяют серологические исследования спинно-мозговой жидкости или сыворотки крови. В спинно-мозговой жидкости обнаруживают повышенное содержание белка и мононуклеаров, могут отмечаться также нейтрофилы. 

С помощью микроскопического изучения биоптата можно отличить Neospora caninum от Toxoplasma gondii: Neospora располагается непосредственно в цитоплазме клетки хозяина, а не в особой вакуоли , как Toxoplasma . Цисты Neospora имеют более толстую оболочку, их можно отличить от таковых Toxoplasma gondii с помощью иммуногистохимического окрашивания. 

Световая микроскопия: дешево, быстро, но низкая чувствительность метода.

По рентгену может быть диффузное усиление рисунка легких при пневмонии.

По МРТ – атрофия мозжечка, мультифокальные Т1,+/- накопление контраста участки в головном и спинном мозге.

Ни один из методов не дает 100% гарантию постановки диагноза.

Анализ кала: применяется метод флотации для выявления ооцист. Клинически больные собаки могут не выделять цисты. Выделение ооцист не подтверждает заболевание

Метод ПЦР зачастую не коррелирует с результатами и ИГХ по причине ограничений каждого из этих методов.

Серологическая диагностика неоспороза- антитела появляются через 2-3 недели после заболевания, хорошо для скрининга популяций (КРС). Увеличение титра через 15-30 дней позволяет определить острое течение у собак. Собаки, выделяющие цисты, не демонстрируют наличие антител.

Данные лабораторных исследований очень важны, но необходимо учитывать клинические данные, эпизоотическую обстановку, ответ на лечение.

Подготовка пациента:

• биоматериал отбирается до введения контраста при миелографии или не ранее чем через 5 дней после проведения процедуры;
• для проведения процедуры необходима общая анестезия;
• в день процедуры животное не следует кормить.

Показания: атаксия, судороги, тремор, неврологический дефицит черепно-мозговых нервов, парезы и параличи, диарея, пневмония, дерматит у щенков.

Противопоказания:

• пункция СМЖ является инвазивной процедурой, для нее характерны все присущие данному виду вмешательств риски;
• процедура не проводится при повышенном внутричерепном давлении;
• вследствие повышенного риска кровоизлияния в субарахноидальное пространство, пункцию СМЖ не проводят при тромбоцитопении.

Метод отбора биоматериала: люмбальная пункция.

Преаналитика:

1. провести процедуру взятия ликвора;
2. перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА);
3. после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
4. заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
5. пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
6. заполнить направительный бланк, указав код клиента;
7. сохранность образца при -17°С…-23°С 1 месяц;
   
8. температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет)
   

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ ЛИКВОРА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Важно! Так как ликвор является малоклеточным материалом, необходимо помнить о возможном получении ложноотрицательного результата.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Neospora caninum.

---

Литература:

1. Тилли Л., Смит Ф. Болезни кошек и собак: справ.,перевод с англ., 2010.-848с.

2. Alves Neto AF et al (2011) Viability of sporulated oocysts of Neospora caninum after exposure to different physical and chemical treatments. J Parasitol 97(1):135-139;

3. Piagentini M et al (2012) Neospora caninum infection dynamics in dairy cattle. Parasitol Res 111(2):717-721

4. Sousa ME et al (2012) Seroprevalence of antibodies to Neospora caninum in dogs in the state of Alagoas, Brazil. Rev Bras Parasitol Vet 21(3):287-290