Бабезиоз (пироплазмоз) (Babesia gibsoni) (ПЦР)

Babesia gibsoni – паразит интраэритроцитарного апикомплекса семейства Babesiidae, вызывающий пироплазмоз собак.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Установлено, что заражение B. gibsoni в природе происходит через слюну присосавшегося иксодового клеща. Основные переносчики бабезий этого вида клещи Haemaphysalis bispinosa (встречается в Индии, Шри-Ланка, Пакистане, Непале, Австралии, Индонезии), H. longicornis (Восточная и Центральная Азия, включая Китай, Корею и Японию, Австралия, Новая Зеландия, Фиджи, Гаваи), Rhipicephalus sanguineus (Европа, Азия, Африка). Также показано, что возбудитель передается при попадании крови зараженных животных в раны здоровым. Феномен такой передачи B. gibsoni зафиксирован во время проведения собачьих боев с участием американских питбулей и тоса-ину. Описаны случаи заражения при переливании крови и трансплацентарно от зараженной матери плоду. Острая форма заболевания обычно приводит к серьезным клиническим проблемам, таким как лихорадка, тромбоцитопения, регенеративная анемия, спленомегалия. Нередко при остро протекающем заболевании регистрируется летальный исход животного. Как правило, заболевание принимает хроническую форму и животные становятся источниками бабезий для здоровых особей.

Постановка клинического диагноза при заражении B. gibsoni затруднена, так как до сих пор не разработаны четкие стандарты диагностики. Гематологические нарушения при заражении B. gibsoni схожи с таковыми, выявляемыми у собак с опосредованной идиопатической иммунной гемолитической анемией и тромбоцитопенией. Также отмечают хрупкость эритроцитарной оболочки, непосредственная травма эритроцитов бабезиями, мощные процессы окисления. Окисление липидов поверхностной оболочки эритроцитов снижает их эластичность, что препятствует их прохождению по сосудистому руслу. Усиление выработки фибриноподобных белков влечет за собой осаждение эритроцитов на стенках сосудов и развитию острой анемии. Наблюдается снижение выработки тромбоцитов, не приводящее к кровотечениям. Нарастающая гипоксия тканей приводит к развитию анемии, шоку, сосудистому гипостазу. Выделение молочной кислоты, как результат гипоксии, основная причина метаболического ацидоза. Наблюдается снижение выработки тромбоцитов, не приводящее к кровотечениям.

При проведении лабораторной диагностики заражения B. gibsoni важно учитывать, что высокочувствительные в данном случае серологические тесты, позволяющие выявить антитела к возбудителю, не выявляют латентно протекающее заболевание. Один из наиболее точных и высокочувствительных методов детекции бабезий мультиплексная ПЦР позволяет выявить одновременно при проведении скрининговых исследований несколько видов бабезий в крови одного животного. Рекомендуется анализ нуклеотидных последовательностей с последующим секвенированием. Метод гибридизации используется для детекции B. gibsoni, ДНК которой выделена из материала с мазков и фиксированных тканях.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Метод исследования: РТ- ПЦР.

Подготовка пациента: небольшой дискомфорт, который может возникнуть при данной манипуляции, рекомендуется устранять путем введения препаратов для местной анестезии, сильнодействующих препаратов или с помощью общей анестезии легкой степени. Перед проведением аспирации шерстный покров сбривают, кожу обрабатывают антисептическим раствором.

Показания:

• лихорадка;
• тромбоцитопения;
• регенеративная анемия;
• спленомегалия.

Противопоказания: непереносимость препаратов для местного обезболивания и противопоказания к общей анестезии, согласно протоколу оценки степеней риска.

Метод отбора биоматериала: аспирация костного мозга.

Преаналитика: 

1. Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).

2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).

3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.

4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.

5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.

6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.    

7. Сохранность образца при -17°С…-23°С 2 недели.

8. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17°С…-23°С (красный пакет).

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ 

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Отрицательный результат не всегда исключает присутствие инфекции.

На сегодняшний день не существует теста, полностью исключающего присутствие бабезий в организме животного; интерпретировать результаты следует на основании клинических признаков. В некоторых случаях положительная ответная реакция на лечение может являться способом постановки правильного диагноза. Наиболее надежным методом выявления бабезий является ПЦР.

Форма выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Babesia gibsoni.

Использованная литература:

1. Alvarado-Rybak M, Solano-Gallego L, Millán J. A review of piroplasmid infections in wild carnivores worldwide: importance for domestic animal health and wildlife conservation.
   Parasit Vectors. 2016 Oct 10;9(1):538
2. Solano-Gallego L, Sainz Á, Roura X, Estrada-Peña A, Miró G.A review of canine babesiosis: the European perspective. Parasit Vectors. 2016 Jun 11;9(1):336. doi: 10.1186/s13071-016-1596-0
3. Beugnet F, Moreau Y.Babesiosis.Rev Sci Tech. 2015 Aug;34(2):627-39. Review.
4. First detection and molecular identification of Babesia gibsoni from Rhipicephalus sanguineus ticks. Li-LianChao Hsin-TingLiaocTsung-YuHocChien-MingShihabcd.