Коронавирусная инфекция кошек (Feline coronavirus) (ПЦР)

Возбудителем энтерита (Feline coronavirus enteritis) и инфекционного перитонита (Feline Infectious Peritonitis, FIP) кошек служит одноцепочечный РНК-вирус семейства Coronaviridae (FCoV). На основании серологических и геномных отличий различают два типа: тип I FCoV- наиболее распространен, тип II FCoV встречается реже и представляет собой рекомбинантную форму между типом I FCoV и коронавирусом собак.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Коронавирус поражает домашних кошек, серопозитивными могут быть и другие виды представителей семейства кошачьих, обитающих в природе. Заболевание встречается повсеместно. Основной источник вируса фекалии зараженных животных, где патоген появляется через неделю с момента заражения. Вирус выделяется из зараженного организма кошки во внешнюю среду в течение нескольких недель, месяцев, отмечено пожизненное носительство, во время которого отмечают повышенную концентрацию патогена в кале. Вирус способен сохраняться во внешней среде один-два дня, иногда до 7 недель и передается через загрязненные лотки, обувь, одежду, руки.

Важно понимать, что у одной из девяти зараженных коронавирусом кошек может развиться FIP. К факторам, провоцирующим развитие этого прогрессирующего и, как правило, неизлечимого заболевания, относят породную принадлежность (абиссинские, австралийские дымчатые, бенгальские, бирманские, бурманские, британские короткошерстные, гималайские, рэгдол, рексы и скотиш-фолды), возраст животного до года и более 10 лет, стрессовые ситуации.

Большинство кошек, инфицированных FCoV, либо остаются здоровыми, либо заболевание проявляются в виде энтерита, протекающего в легкой форме. Первичная инфекция длится в течение 7-18 месяцев и может приводить к:

1. выздоровлению,
2. персистентному выделению FCoV;
3. рекуррентному выделению FCoV.

Реинфицирование довольно часто наблюдается при совместном содержании кошек.

У котят после первичного или вторичного инфицирования достоверно чаще развиваются клинические признаки FIP, а интенсивность выделения вируса существенно выше в сравнении с взрослыми животными. Обусловленная вирусом и другими факторами иммуносупрессия способствует репликации и интенсивному выделению FECV.

Инфицирование FECV отмечают после нивелирования материнских антител у котят на 4-8 неделе жизни. Заболевание может развиться через несколько недель после инфицирования, но чаще через 6-18 месяцев. Системный воспалительный пиогранулематоз, как правило, развивается через 6-18 месяцев с момента заражения. Клинические симптомы FIP часто меняются с течением времени и зависят от поражения тех или иных органов, преобладания воспалительных либо экссудативных процессов. Характерны летаргия, отсутствие аппетита, периодическая лихорадка, не поддающаяся антибиотикотерапии, отмечают повышенную жажду и полиурию. Возможно образование плевральных или абдоминальных выпотов. На долю FIP приходится около 10% случаев перикардиального выпота у кошек, данная инфекция является третьей наиболее распространенной причиной этой патологии после кардиомиопатии и неоплазии. В некоторых случаях перикардиальный выпот может вызывать тампонаду сердца. Пиогранулематозные или гранулематозные воспалительные процессы вызывают брыжеечную лимфаденопатию, реномегалию, развитие новообразований кишечника, гепатомегалию, желтуху, пневмонию, увеит, хориоренит. У 10% кошек при FIP наблюдаются неврологические симптомы, такие как локальные и генерализованные судороги, которые вызываются преимущественно менингоэнцефалитом, менингомиелитом, эпендимитом и обструктивной гидроцефалией. В некоторых случаях отмечается выраженная анемия, вызванная иммунообусловленным гемолизом или микроангиопатией.

Окончательный диагноз при FIP ставится только на основании результата иммуногистохимического окрашивания антигена коронавируса при наличии пиогранулематозного или гранулематозного васкулита. Ввиду сложности получения биоптатов у кошек при FIP, прижизненная диагностика инфекции часто основана на данных анамнеза, результатах клинического осмотра и лабораторных исследований, а также на исключении других возможных причин болезни. Вследствие того, что образование выпотов является характерной особенностью болезни, необходимо получение соответствующих образцов и их исследование. Результаты исследования выпота более информативные, чем результаты исследования крови.

Для обнаружения FCoV были разработаны тест-системы ПЦР с обратной транскрипцией, однако они не позволяют дифференцировать вирулентные и авирулентные штаммы вируса. Поскольку авирулентные штаммы могут обнаруживаться в крови и других тканях кошек, у которых отсутствует FIP, диагностическое значение имеет обнаружение вируса лишь в желудочно-кишечном тракте. Возможно получение ложноотрицательных результатов исследования методом ПЦР при низкой концентрации вируса в исследуемом образце либо в результате разрушения вирусной РНК при длительном хранении. Для диагностики FIP клинически значимым будет являться обнаружение РНК вируса в выпотной жидкости при экссудативной форме инфекции.

Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов)

Исследуемый аналит: асцитная, торакальная, перикардиальная жидкость.

Метод исследования: ПЦР Real-time.

Подготовка пациента: лапароцентез и плевроцентез – минимально инвазивные манипуляции, которые легко провести; она сопряжена с минимальным риском и дискомфортом животного. Процедура обычно проводится без наркоза; седация может потребоваться в том случае, если животное беспокойно (особенно кошки) или испытывает боль. Перед проведением процедуры перикардиоцентеза, необходимо информировать владельца животного о потенциальных рисках и осложнениях вмешательства, вероятность которых зависит не только от опытности специалиста, но также и от причины перикардиального выпота (часто неивестной на момент выполнения процедуры). Перикардиоцентез также может усугублять кровотечение из крупных и нежных опухолей, что, в свою очередь может усиливать тампонаду или индуцировать остановку сердца и дыхания.

Показания: скопление жидкости в брюшной, грудной, перикардиальной полостях, подтвержденное данными физикального обследования и диагностической визуализации (рентгенографическое исследование, УЗИ грудной и брюшной полости, данных ЭХОКГ).

Противопоказания: для лапароцентеза - расширенные петли кишечника; полная кишечная непроходимость; органомегалия; увеличенная матка (беременность); нужно избегать быстрой эвакуации большого объема жидкости, особенно без предшествующего поступления натрия.

Для перикардиоцентеза – недостаточный объем перикардиального выпота, когда риск перикардиоцентеза превосходит его потенциальную пользу. Относительными противопоказаниями могут являться: геморрагический перикардиальный выпот, обусловленный геморрагическими состояниями, или капиллярное эндокардиальное кровотечение, когда снижение давления в полости перикарда может усилить кровотечение. Перикардиоцентез не показан при увеличении размеров перикарда при солидных опухолях или наличии в его полости органов брюшной полости (при диафрагмальных грыжах).

Торакоцентез не следует проводить у животных с нарушенным гомеостазом.

Метод отбора биоматериала: лапароцентез, торакоцентез, перикардиоцентез, согласно методикам проведения данных процедур.

Преаналитика:

1. Провести пункцию соответствующей полости тела.
2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).
3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.
6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Формат выдачи результата: качественный анализ.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе РНК коронавируса кошек (FCoV).

Использованная литература:

1. de Vries AAF, Horzinek MC, Rottier PJM, de Groot RJ. The genome organization of the nidovirales: similarities and differences between arteri-, toro-, and coronaviruses. Semin Virol 1997; 8: 33–47.
2. Addie DD, Schaap IA, Nicolson L, Jarrett O. Persistence and trans-mission of natural type I feline coronavirus infection. J Gen Virol 2003; 84: 2735–44.
3. Hartmann K, Binder C, Hirschberger J, et al. Comparison of differ-ent tests to diagnose feline infectious peritonitis. J Vet Intern Med 2003; 17: 781–90.
4. Kass PH, Dent TH. The epidemiology of feline infectious peritonitis. Feline Pract 1995; 23: 27–32.
5. Cave TA, Thompson H, Reid SWJ, Hodgson DR, Addie DD. Kitten mortality in the United Kingdom: a retrospective analysis of 274 histopathological examinations (1986–2000). Vet Rec 2002; 151: 497–501.