Криптококкоз (Cryptococcus spp.) (ПЦР)

роду Cryptococcus относятся минимум 19 видов инкапсулированных дрожжей. Криптококкоз является наиболее распространенным системным грибковым заболеванием кошек, собак и других животных, а также людей во всем мире. Это вызвано комплексом видов Cryptococcus neoformans - Cryptococcus gattii, который включает восемь генотипов и несколько подтипов (штаммов) с различным географическим распространением, патогенностью и чувствительностью к антимикробным препаратам. Прогноз в большинстве случаев благоприятный, если диагноз поставлен достаточно рано и сохраняется длительное лечение. Базидиоспоры являются инфекционными агентами видов Cryptococcus, поскольку они проникают в дыхательную систему и вызывают первичную инфекцию. Бессимптомная колонизация дыхательных путей встречается чаще, чем клиническое заболевание. Птичий помет, особенно голубиный, создает благоприятные условия для размножения C. neoformans. Оба вида криптококков связаны с гниющей растительностью.

Жизненный цикл Cryptococcus spp. включает рост возбудителя в тканях хозяина в виде инкапсулированных почкующихся дрожжей, при существовании в окружающей среде грибы способны образовывать мицелий. Капсула грибка после проникновения в организм хозяина утолщается, что обеспечивает защиту от фагоцитоза. В тканях криптококки размножаются с образованием одной или двух дочерних клеток (почек), соединенных с родительской клеткой тонким мостиком.

Криптококкоз, вызываемый C neoformans или C gattii, клинически неотличим. Заболевание может поражать: дыхательную, центральную нервную системы (которая может происходить из назальной формы или возникать независимо), кожной и системной формах.

Криптококкоз часто диагностируют у взрослых молодых собак. В отличие от кошек, у собак криптококкоз обычно принимает тяжелую диссеминированную форму. Распространенными неспецифическими признаками болезни являются снижение массы тела, летаргия и отсутствие аппетита. Риносинусит при криптококкозе протекает в субклинической форме, поэтому его инцидентность может недооцениваться. У больных собак наблюдаются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта и поджелудочной железы, такие как рвота, диарея и абдоминальная боль. При проведении посмертного вскрытия более чем у половины собак обнаруживают признаки поражения нижних дыхательных путей, которые редко сопровождаются клиническими симптомами при жизни. К другим клиническим симптомам, иногда наблюдаемым у собак, относятся периферическая лимфаденомегалия и хромота (вызванная остеомиелитом или артритом). У многих собак, больных криптококкозом, летаргия и заторможенность вызваны вовлечением в патологический процесс ЦНС. К другим симптомам со стороны ЦНС относятся нарушение зрачковых реакций, нистагм, мидриаз, наклон головы, страбизм, анизокория, паралич лицевых мышц, парапарез, атаксия, хождение по кругу и судороги. Наиболее распространенными симптомами поражения глаз являются хориоретинит, отек диска зрительного нерва, неврит зрительного нерва и отслоение сетчатки. При поражении носовой полости может наблюдаться нарушение тока воздуха по носовым ходам. При этом отмечается образование узелков, масс и язв в носовой полости, на языке, слизистой оболочке щек, твердого неба и губ. Передача возбудителя возможна через контаминированные предметы, а также прямая передача больными животными.

Постановка окончательного диагноза при криптококкозе обычно не представляет сложности и основана на результатах цитологического исследования пораженных тканей, обнаружения антигена криптококков серологическими методами, бактериологического посева, а также исследования методом ПЦР. При этом используются мазки и смывы из носовой полости, аспираты из пораженных тканей, увеличенных лимфоузлов, бронхоальвеолярные смывы, плевральная жидкость, цереброспинальная жидкость и моча.

Существуют тест-системы ПЦР в реальном времени, позволяющие обнаруживать Cryptococcus spp. ПЦР позволяет подтвердить наличие ДНК криптококков в биологических жидкостях и тканях, когда иные методы исследования не дают однозначного результата.

Исследуемый аналит: аспират, полученный методом бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ)

Метод исследования: ПЦР-РТ

Показания:

• взятие образца у животных во время бронхоскопии, а также для диагностики в тех случаях, когда у животного наблюдается кашель, затрудненное дыхание, выявляются патологические изменения в легких при рентгенографическом исследовании или другие признаки заболевания респираторного тракта;
• при необходимости получения образцов у животных с признаками таких респираторных заболеваний, при которых результат других, менее инвазивных процедур (соскоб эпителиальных клеток из носовой полости), оказался не информативен.

Противопоказания:

• отсутствие в клинике условий для обеспечения животного дополнительным кислородом в течение нескольких часов после проведения БАЛ;
• исследование противопоказано тем животным, у которых наблюдается затруднение дыхания даже на фоне назначения им кислородотерапии;
• любые противопоказания для проведения общей анестезии.

Подготовка пациента:

• утром перед исследованием животное не кормить.
• Так как процедура бронхо-альвеолярного лаважа проводится под общей седацией, пациента необходимо подготовить, в соответствии с соблюдением всех требований, в зависимости от группы анестезиологического риска.
• Биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов.
• Техника взятия должна проводиться с соблюдением правил асептики/антисептики для минимизирования возможной контаминации из верхних дыхательных путей.

Метод отбора: Бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ) – это метод получения образца жидкости с диагностической целью из мелких дыхательных путей – альвеол и в некоторых случаях из интерстициальных тканей. Лаваж (смыв) обычно выполняют во время бронхоскопии, что позволяет провести визуальный осмотр дыхательных путей и осуществить прицельный смыв с определенных долей легких. Кроме того, БАЛ можно выполнять и без бронхоскопа. Стерильный физиологический раствор вводят в легкие в достаточном объеме, чтобы он заполнил альвеолы. Затем раствор вместе с клетками и жидкостью с эпителиальной выстилки легких аспирируют обратно.

Преаналитика:

1. провести процедуру взятия бронхоальвеолярного лаважа;
2. перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА;
3. после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
4. заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
5. пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
6. заполнить направительный бланк, указав код клиента;
7. cохранность образца при  -17°С…-23°С 2 недели.

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ БАЛ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация результата: 

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Cryptococcus spp.

Список источников:

1. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф.Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.

2. Infection diesases of the dog and cat, Fourth edition, ISBN: 978-1-4160-6130-4 Copyright © 2012, 2006, 1998, 1990 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.

3. Cryptococcosis in cats: ABCD guidelines for prevention and treatment. Maria Grazia Pennisi 1, Catherine Hartmann, Albert Lloret, Luis Ferrer, Diane Addy, Sandor Belak, Corinne Boucro-Baralon, Herman Egberink, Tadeusz Frimus, Tim Gruffudd-Jones, Margaret J. Hosie, Hans Lutz, Fulvio Marsilio, Carinne Marsilio Alan D. Radford, Etienne Thiry, Owe Truyen, Marian C. Horzinek. J Feline Med Surg. 2013 июл; 15 (7): 611-8. DOI: 10.1177 / 1098612X13489224.