Криптоспоридиоз (Cryptosporidium spp.) (ПЦР)

Cryptosporidium – это род кокцидий из семейства Apicomplexa, населяющих эпителий респираторного и пищеварительного тракта различных животных. Ранее считалось, что криптоспоридиоз млекопитающих вызывается Cryptosporidium parvum, однако молекулярные исследования показали, что у кошек обычно наблюдается инвазия Cryptosporidium felis, а у собак – Cryptosporidium canis, у обоих видов иногда встречается C. parvum.

Передача C. felis и C. canis происходит при проглатывании ооцист при взаимном груминге, поглощении контаминированного корма и воды. Ооцисты выводятся с фекалиями больных животных уже спорулированными и являются инвазионными немедленно после попадания во внешнюю среду. Примерно 20% ооцист, образующихся в кишечнике, имеют тонкую стенку, они разрушаются в кишечнике, при этом происходит выделение спорозоитов и аутоинвазирование. Ооцисты с толстой стенкой, которые выводятся с фекалиями, устойчивы к действию факторов внешней среды. У большинства инвазированных собак и кошек какие-либо клинические симптомы отсутствуют, диарея обычно наблюдается у молодых животных, при этом фекалии обычно водянистые и не содержат слизи или крови. При наличии коинвазии другими простейшими, такими как Giardia spp. (у собак и кошек) или Tritrichomonas foetus (кошки), а также иммуносупрессивных патологий, как лимфома, инфекция FeLV, чума плотоядных или парвовирусная инфекция собак, заболевание обычно протекает в более тяжелой форме. Клинические симптомы чаще встречаются у кошек, инвазированных C. felis, чем у собак с инвазией C. canis. Патогенез криптоспоридиоза у собак и кошек изучен недостаточно, имеющаяся информация основана на исследованиях инвазий C. parvum у человека и мышей. После проглатывания ооцист Cryptosporidium spp. из них выходят ооцисты и прикрепляются к эпителию кишечника. Кокцидия располагается в паразитоформной вакуоли, таким образом, паразит расположен внутриклеточно, но экстраплазматически. Такое расположение может частично объяснить его резистентность к антипротозойным лекарственным средствам. Эпителиальные клетки кишечника выполняют роль физического барьера для возбудителя и синтезируют ряд цитокинов и хемокинов в ответ на инвазию. При этом наблюдается инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки нейтрофилами, макрофагами и лимфоцитами. Отмечается повышение активности провоспалительных и противовоспалительных цитокинов. Соотношение между концентрациями данных цитокинов, очевидно, определяет развитие диареи. Клеточный иммунитет, который регулируется CD4+ и CD8+α/β T-клетками, играет важную роль в процессе выздоровления.

Моноинвазия Cryptosporidium spp. редко сопровождается изменениями гематологических и биохимических показателей крови. При выраженной диарее могут наблюдаться нарушения электролитного и кислотно-основного обмена. При наличии сопутствующих иммуносупрессивных патологий, таких как инфекции FeLV и FIV, регистрируются соответствующие изменения лабораторных показателей.

Диагностика криптоспоридиоза основана на результатах цитологического, гистопатологического, серологического исследований и ПЦР. В нашей лаборатории проводят диагностику с помощью ПЦР, являющейся наиболее надежным методом обнаружения криптоспоридиоза. Имеющиеся тест-системы ПЦР позволяют выделить ДНК Cryptosporidium spp. из образцов фекалий больных животных и дифференцировать различные виды криптоспоридий.

Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: фекалии.

Метод исследования: РТ - ПЦР .

Подготовка пациента: 

• не рекомендуется исследование фекалий, если животное получает сорбенты;

• не рекомендуется исследование фекалий, если использовались местные слабительные лекарственные средства.

Показания: острая и хроническая диарея у животных неясной этиологии в комплексной диагностике.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: сбор пробы фекалий в контейнер.

Преаналитика:

1. поместить фекалии размером с лесной орех в стерильный контейнер с ложечкой и крышкой (ККЛ).
2. Подписать контейнер, указав вид и кличку животного, данные владельца, заполнить все графы направительного бланка.
3. Сохранность образца 3 дня при +2°С …+8°С.
4. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С … +8°С (синий пакет).

Интерпретация результата: 

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Ввиду того, что ооцисты криптоспоридий или ДНК возбудителя могут обнаруживаться у клинически здоровых животных, положительные результаты исследования не всегда указывают на наличие болезни.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Cryptosporidium spp.

Литература:

1. Craig E. Greene, DVM, MS, DACVIM, Infectious dieseases of the dog and  cat , fourth  edition;
2. Scorza V, Tangtrongsup S. Update on the diagnosis and management of Cryptosporidium spp infections in dogs and cats. Top Companion Anim Med. 2010 Aug; 25(3):163-9. doi: 10.1053/j.tcam.2010.07.007.
3. Bush JM, Speer B, Opitz N.Vet Clin North Am Small Anim Pract. Disease transmission from companion parrots to dogs and cats: what is the real risk? . 2011 Nov;41(6):1261-72. doi: 10.1016/j.cvsm.2011.07.004.