Ретикулоциты кошек

Определение количества ретикулоцитов используется при наличии анемии. Скорость высвобождения ретикулоцитов из костного мозга является лучшим показателем функции эритроидного компонента костного мозга.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Ретикулоциты – незрелые безъядерные эритроциты млекопитающих, которые содержат остаточные РНК и митохондрии, агрегированные в форме гранулярной сетчатой структуры (ретикулума) и выявляемые при использовании метода суправитального окрашивания метиленовым синим (окраска живых клеток). При созревании эритроцитов эта ретикулярная сеть исчезает. Высвобождение ретикулоцитов из костного мозга происходит в ответ на анемию. В зависимости от содержания остаточного количества рибосом и, соответственно, зрелости клеток выделяют два вида ретикулоцитов: агрегатные и зернистые (пунктатные). Агрегатные ретикулоциты циркулируют в крови в течение короткого промежутка времени (около 12 часов), прежде чем превратятся в зернистые (пунктатные) ретикулоциты, которые затем (через 10 дней) преобразовываются в зрелые эритроциты. Количество зернистых (пунктатных) и агрегатных ретикулоцитов возрастает с увеличением интенсивности эритропоэза. Поскольку зернистые ретикулоциты циркулируют в течение нескольких недель и сохраняются после того, как уровень агрегатных ретикулоцитов вернется в пределы референсных значений, их подсчет не имеет большого клинического значения при оценке текущего регенераторного ответа. Присутствие зернистых ретикулоцитов указывает на реакцию костного мозга на анемию, имевшую место примерно три недели назад.

При исследовании ретикулоцитов определяется процент ретикулоцитов путем пересчета на 1000 зрелых эритроцитов. При использовании этого показателя возможна некорректная оценка ответа костного мозга, потому как:

1. Ретикулоциты, высвобождаемые из костного мозга в кровь у животных при анемии, смешиваются с меньшим количеством зрелых эритроцитов. Таким образом, в результате происходит завышение процента ретикулоцитов.
2. Менее зрелые формы ретикулоцитов выходят в кровяное русло в ответ на анемию раньше (сдвиг ретикулоцитов). Эти ретикулоциты дольше сохраняются в крови потому, что им требуется больше времени для созревания, что приводит к завышению процента ретикулоцитов.

Скорректированный процент ретикулоцитов. При его расчете учитывается величина гематокрита. Вносимая корректировка актуальна только в случае, указанном в пункте 1, но не в случае, указанном в пункте 2. Скорректированный процент ретикулоцитов больше чем 1% у собак и 0,4% у кошек указывает на стимуляцию костного мозга в ответ на анемическое состояние. Скорректированный процент ретикулоцитов не был подтвержден для использования у других видов животных.

Абсолютное число ретикулоцитов. Этот параметр вносит коррективы в случае, описанном в пункте 1 (выше), но не корректирует эффект, описанный в пункте 2. Получение абсолютного числа ретикулоцитов больше чем 80 х 10ˆ9/л у собак и более 60 х10ˆ9/л у кошек указывает на регенеративный ответ (регенераторную анемию), и что причиной анемии являются внешние воздействия на костный мозг (т. е. кровотечение или гемолиз). В зависимости от снижения гематокрита или при очень низком гематокрите должно иметь место пропорционально более высокое абсолютное число ретикулоцитов.

Ретикулоцитарный индекс. Этот поправочный коэффициент используется для человека, но также был применен у собак и кошек для корректировки пунктов 1 и 2 (см. выше). Значимость этого параметра остается спорной, поскольку отсутствуют данные, подтверждающие успешное его использование у животных.

В крови здоровых собак может содержаться небольшое количество ретикулоцитов (до 1%). У собак все ретикулоциты агрегатные, т. е. они больше, чем зрелые эритроциты, и содержат большие глыбки агрегированных рибосом. Ретикулоцитоз у кошек менее выражен, чем у собак. У кошек выделяют две формы ретикулоцитов: зернистые (пунктатные) и агрегатные. Зернистые ретикулоциты более зрелые, чем агрегатные, и близки по размерам к созревшим эритроцитам. Они содержат от двух до шести мелких включений гранулярно-нитчатой субстанции остаточной РНК. У здоровых кошек может насчитываться до 10% зернистых (пунктатных) ретикулоцитов. После эпизода разрушения эритроцитов, возрастание числа зернистых (пунктатных) ретикулоцитов происходит через одну неделю, пик роста приходится на 2-3 неделю, затем их число постепенно снижается. Таким образом, увеличение зернистых (пунктатных) ретикулоцитов указывает на стимуляцию регенераторного ответа, произошедшую за 2-4 недели до этого, в то время как увеличение агрегатных ретикулоцитов указывает на недавнюю стимуляцию костного мозга. Увеличение числа агрегатных ретикулоцитов свидетельствует о текущей активности костного мозга в ответ на анемию (т. е. увеличение интенсивности эритропоэза или регенерации). Определение количества агрегатных ретикулоцитов является наиболее полезным при оценке реакции костного мозга при анемии, при этом зернистые (пунктатные) ретикулоциты обычно не подсчитываются (они считаются зрелыми клетками). Тем не менее, при легкой степени анемии подсчет пунктатных ретикулоцитов является полезным, поскольку обычно происходит сохранение агрегированных ретикулоцитов в костном мозге до их созревания в зернистые (пунктатные).

Отсутствие ретикулоцитов после развития анемии позволяет предположить отсутствие адекватной реакции костного мозга (нерегенеративную анемию). Это может наблюдаться при нехватке времени для развития ретикулоцитоза, недостаточности ретикулоцитарного ответа или нарушении эритропоэза.

Исследуемый аналит: кровь с ЭДТА.

Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.

Показания:

• установить, что является причиной появления изменений: снижение образования эритроцитов или повышенное разрушение, или потеря эритроцитов.
• Оценить ответ эритроидного ростка костного мозга ( т.е. подтвердить наличие или отсутствие регенетаторного ответа на анемию).

Противопоказания: неизвестны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика: 

1. Взятие крови – пробирка с сиреневой крышкой / калий ЭДТА. Для мелких животных можно использовать пробирку с розовой крышкой.

2. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке.

3. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом.

4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента.

5. Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8° С.

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Любое повышение сверх референсного интервала позволяет сделать вывод о регенеративном ответе на анемию. Отсутствие повышения позволяет сделать вывод о наличии нерегенеративной анемии. У кошек в норме количество циркулирующих зернистых ретикулоцитов выше. Степень ретикулоцитоза должна всегда интепретироваться с учетом тяжести и длительности анемии.

Высокие значения при анемии (регенеративная анемия):

Острая кровопотеря:

• Травма;
• Новообразования;
• Операция;
• Изъязвления органов ЖКТ;
• Нарушение гемостаза;

Гемолиз:

• иммуноопосредованный (первичный или вторичный);
• паразиты в эритроцитах;
• окислители (например, парацетамол, репчатый лук);
• токсическое действие цинка или меди;
• фрагментация (ДВС, новообразование; ангиостронгилез);
• отравление ядом змеи.

Низкие значения при анемии (нерегенеративная анемия):

• острое кровотечения или гемолиз (давностью менее 1-2 дней), функционально среагировать на которые у костного мозга не было времени;
• анемия или хронические заболевания;
• недостаток эритропоэтина (хроническое заболевание почек);
• эндокринопатии (например, гипотиреоз);
• дефицит железа (обычно вторичный по отношению к хроническому кровотечению во внешнюю среду и обычно с микроцитозом);
• заболевание костного мозга (снижение образования);
• инфекции (ВЛК, ВИК, панлейкопения и др.);
• миелофтиз;
• токсическое поражение костного мозга;
• истинная эритроцитарная аплазия;
• эритроидные миелопролиферативные или миелодисплатические заболевания;
• дефицит питательных веществ (редко).

Форма выдачи результата: количественный. Единицы измерения – клеток/ мкл.

Референсные значения: агрегатные ретикулоциты:

• <15000 - угнетение регенерации
• 15000-50000 - физиологическая регенерация (недостаточная регенерация у пациента с анемией)
• 50000-100000 - умеренная регенерация
• 100000-200000 - выраженная регенерация
• >200000 - значительно выраженная Регенерация.

Пунктатные ретикулоциты:

• <200000 - физиологическая регенерация
• 200000-500000 - легкая регенерация
• 500000-1000000 - умеренная регенерация
• >1000000 - выраженная регенерация.

Литература:

1. Ш.Ваден,Д.Нолл, Ф. Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.

2. Clinical pathology for the veterinary team / Andrew J. Rosenfeld, Sharon Dial.