Ретикулоциты собак

Определение количества ретикулоцитов используется при наличии анемии. Скорость высвобождения ретикулоцитов из костного мозга является лучшим показателем функции эритроидного компонента костного мозга.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Ретикулоциты – незрелые безъядерные эритроциты млекопитающих, которые содержат остаточные РНК и митохондрии, агрегированные в форме гранулярной сетчатой структуры (ретикулума) и выявляемые при использовании метода суправитального окрашивания метиленовым синим (окраска живых клеток). При созревании эритроцитов эта ретикулярная сеть исчезает. Высвобождение ретикулоцитов из костного мозга происходит в ответ на анемию. В зависимости от содержания остаточного количества рибосом и, соответственно, зрелости клеток выделяют два вида ретикулоцитов: агрегатные и зернистые (пунктатные). Агрегатные ретикулоциты циркулируют в крови в течение короткого промежутка времени (около 12 часов), прежде чем превратятся в зернистые (пунктатные) ретикулоциты, которые затем (через 10 дней) преобразовываются в зрелые эритроциты. Количество зернистых (пунктатных) и агрегатных ретикулоцитов возрастает с увеличением интенсивности эритропоэза. Поскольку зернистые ретикулоциты циркулируют в течение нескольких недель и сохраняются после того, как уровень агрегатных ретикулоцитов вернется в пределы референсных значений, их подсчет не имеет большого клинического значения при оценке текущего регенераторного ответа. Присутствие зернистых ретикулоцитов указывает на реакцию костного мозга на анемию, имевшую место примерно три недели назад.

При исследовании ретикулоцитов определяется процент ретикулоцитов путем пересчета на 1000 зрелых эритроцитов. При использовании этого показателя возможна некорректная оценка ответа костного мозга, потому как:

1. Ретикулоциты, высвобождаемые из костного мозга в кровь у животных при анемии, смешиваются с меньшим количеством зрелых эритроцитов. Таким образом, в результате происходит завышение процента ретикулоцитов.
2. Менее зрелые формы ретикулоцитов выходят в кровяное русло в ответ на анемию раньше (сдвиг ретикулоцитов). Эти ретикулоциты дольше сохраняются в крови потому, что им требуется больше времени для созревания, что приводит к завышению процента ретикулоцитов.

Скорректированный процент ретикулоцитов. При его расчете учитывается величина гематокрита. Вносимая корректировка актуальна только в случае, указанном в пункте 1, но не в случае, указанном в пункте 2. Скорректированный процент ретикулоцитов больше чем 1% у собак и 0,4% у кошек указывает на стимуляцию костного мозга в ответ на анемическое состояние. Скорректированный процент ретикулоцитов не был подтвержден для использования у других видов животных.

Абсолютное число ретикулоцитов. Этот параметр вносит коррективы в случае, описанном в пункте 1 (выше), но не корректирует эффект, описанный в пункте 2. Получение абсолютного числа ретикулоцитов больше чем 80х109/л у собак и более 60х109/л у кошек указывает на регенеративный ответ (регенераторную анемию), и что причиной анемии являются внешние воздействия на костный мозг (т. е. кровотечение или гемолиз). В зависимости от снижения гематокрита или при очень низком гематокрите должно иметь место пропорционально более высокое абсолютное число ретикулоцитов.

Ретикулоцитарный индекс. Этот поправочный коэффициент используется для человека, но также был применен у собак и кошек для корректировки пунктов 1 и 2 (см. выше). Значимость этого параметра остается спорной, поскольку отсутствуют данные, подтверждающие успешное его использование у животных.

В крови здоровых собак может содержаться небольшое количество ретикулоцитов (до 1%). У собак все ретикулоциты агрегатные, т. е. они больше, чем зрелые эритроциты, и содержат большие глыбки агрегированных рибосом. Ретикулоцитоз у кошек менее выражен, чем у собак. У кошек выделяют две формы ретикулоцитов: зернистые (пунктатные) и агрегатные. Зернистые ретикулоциты более зрелые, чем агрегатные, и близки по размерам к созревшим эритроцитам. Они содержат от двух до шести мелких включений гранулярно-нитчатой субстанции остаточной РНК. У здоровых кошек может насчитываться до 10% зернистых (пунктатных) ретикулоцитов. После эпизода разрушения эритроцитов, возрастание числа зернистых (пунктатных) ретикулоцитов происходит через одну неделю, пик роста приходится на 2-3 неделю, затем их число постепенно снижается. Таким образом, увеличение зернистых (пунктатных) ретикулоцитов указывает на стимуляцию регенераторного ответа, произошедшую за 2-4 недели до этого, в то время как увеличение агрегатных ретикулоцитов указывает на недавнюю стимуляцию костного мозга. Увеличение числа агрегатных ретикулоцитов свидетельствует о текущей активности костного мозга в ответ на анемию (т. е. увеличение интенсивности эритропоэза или регенерации). Определение количества агрегатных ретикулоцитов является наиболее полезным при оценке реакции костного мозга при анемии, при этом зернистые (пунктатные) ретикулоциты обычно не подсчитываются (они считаются зрелыми клетками). Тем не менее, при легкой степени анемии подсчет пунктатных ретикулоцитов является полезным, поскольку обычно происходит сохранение агрегированных ретикулоцитов в костном мозге до их созревания в зернистые (пунктатные).

Отсутствие ретикулоцитов после развития анемии позволяет предположить отсутствие адекватной реакции костного мозга (нерегенеративную анемию). Это может наблюдаться при нехватке времени для развития ретикулоцитоза, недостаточности ретикулоцитарного ответа или нарушении эритропоэза.

Исследуемый аналит: кровь с ЭДТА.

Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.

Показания:

• установить, что является причиной появления изменений: снижение образования эритроцитов или повышенное разрушение или потеря эритроцитов.
• Оценить ответ эритроидного ростка костного мозга (т.е. подтвердить наличие или отсутствие регенераторного ответа на анемию).

Противопоказания: неизвестны.

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика: 

1. Взятие крови – пробирка с сиреневой крышкой / калий ЭДТА. Для мелких животных можно использовать пробирку с розовой крышкой.

2. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке.

3. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом.

4. Контейнер маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, заполнить направительный бланк, указав код клиента.

5. Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8° С.

6. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С…+8° С (синий пакет).

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

В крови здорового животного ретикулоциты отсутствуют или присутствуют в незначительном количестве менее 1,5%. До 48 часов после острого кровотечения или гемолиза увеличение числа ретикулоцитов бывает не столь заметным, максимальное увеличение наблюдается на 4-7-ой день. Развитие ретикулоцитоза может быть отсрочено у животных с различными системными заболеваниями и у пожилых животных. При регенеративной анемии в условиях адекватного функционирования костного мозга величина ретикулоцитарного ответа должна соответствовать степени тяжести анемии (чем тяжелее анемия и ниже гематокрит, тем сильнее ретикулоцитарный ответ). Гемолитические анемии обычно приводят к более заметному ретикулоцитозу, чем постгеморрагические анемии. Железо из разрушенных эритроцитов более легкодоступно для эритропоэза, чем железо, которое хранится в виде гемосидерина.

Количество ретикулоцитов должно интерпретироваться с учетом степени анемии. Предпочтительнее пользоваться показателем абсолютного числа ретикулоцитов (АЧР), чем процентом ретикулоцитов, так как на показатель АЧР не влияют изменения общего количества эритроцитов. У животных при легкой и тяжелой степени анемии в крови циркулирует одинаковое абсолютное число ретикулоцитов, но процент ретикулоцитов выше при тяжелой анемии, поскольку в крови меньше зрелых клеток. Это может дать ложное впечатление о том, что тяжелая анемия имеет более регенеративный характер, чем умеренная анемия. В качестве альтернативы можно использовать показатель скорректированного процента ретикулоцитов. Иногда для собак используют расчетный ретикулоцитарный индекс. С увеличением тяжести анемии ретикулоциты проводят меньше времени в костном мозге, выходят менее созревшими и дольше находятся в крови до созревания в эритроциты. Это означает, что скорректированный процент ретикулоцитов и абсолютное количество ретикулоцитов могут переоценивать степень активности эритропоэза в костном мозге. Однако ретикулоцитарный индекс не является достоверным у собак и кошек, поскольку в формуле для его расчета используются данные о времени созревания эритроцитов человека, а для животных такие временные характеристики пока неизвестны. Поэтому для животных этот показатель редко рассчитывается с предпочтением подсчета абсолютного количества ретикулоцитов.

Единицы измерения: Абсолютное число ретикулоцитов – клеток /мкл.

Референсные значения:

• <60000-угнетение регенерации
• 60000-80000-физиологическая
• регенерация(угнетение у пациента с анемией)
• 80000-150000-легкая регенерация
• 150000-300000-умеренная регенерация
• 300000-500000-выраженная регенерация
• >500000-значительно выраженная.

Повышение показателя при анемии (регенеративная анемия):

• Острая потеря крови.
• Гемолиз.
• Токсическое действие цинка или меди.
• Фрагментация эритроцитов (ДВС-синдром, неоплазия, инвазии кровепаразитов).
• Действие змеиного яда.

Понижение показателя при анемии (нерегенеративная анемия):

• Острая кровопотеря или гемолиз (длительностью менее 1-2 дней), когда костный мозг еще не успел отреагировать.
• Анемия хронических заболеваний.
• Недостаточный синтез эритропоэтина (хроническая болезнь почек).
• Эндокринопатии (в том числе гипотиреоз).
• Дефицит железа (как правило, вторичный по отношению к хроническому наружному кровотечению и обычно выявляемым микроцитозом).
• Заболевания костного мозга (снижение способности синтеза).
• Инфекционные заболевания (парвовироз, эрлихиоз и др.).
• Миелофтиз.
• Токсическое повреждение костного мозга.
• Истинная эритроцитарная аплазия.
• Миелопролиферативные или миелодиспластические заболевания.
• Дефицит питательных веществ (редко).