Toxoplasma gondii (ПЦР)

Toxoplasma gondii - кокцидия, которая является самым распространенным паразитом теплокровных животных по всему миру.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Окончательными хозяевами паразита являются кошки, в организме которых происходит завершение половой фазы развития (энтероэпителиальный цикл), после чего с фекалиями выделяются ооцисты, устойчивые к действию факторов внешней среды. Развитие спорозоитов внутри ооцист происходит в течение 1-5 дней после контакта последних с кислородом, при определенной температуре и влажности, этот процесс называется спорулированием. После проглатывания ооцист из них выходят спорозоиты, которые попадая в желудочно-кишечный тракт кошек и промежуточных хозяев, проникают затем в кровь и лимфу в форме тахизоитов. T. gondii может проникать в большинство клеток млекопитающих и проходить там бесполое размножение, которое продолжается до разрушения клетки. При наличии иммунного ответа репликация тахизоитов приостанавливается и происходит развитие медленно делящихся брадизоитов, которые могут персистировать в цистах в тканях вне кишечника. Данные тканевые цисты могут образовываться в органах центральной неравной системы, мышцах и внутренних органах. Живые брадизоиты могут персистировать в тканевых цистах на протяжении всей жизни животного-хозяина. Серопревалентность к T. gondii варьирует в зависимости от таких факторов, таких как образ жизни и возраст животного.

Энтероэпителиальный цикл развития происходит только в организме окончательного хозяина — кошки. Считается, что инвазирование большинства кошек происходит при проглатывании промежуточных хозяев, зараженных T. gondii. Брадизоиты выходят в просвет желудка и кишечника из тканевых цист, после чего проникают в эпителиальные клетки тонкого кишечника, за этим следуют пять стадий бесполого развития. Ооцисты токсоплазм имеют округлую или овальную форму и размер 10х12 мкм, ооцисты, находящиеся в фекалиях, являются неспорулированными (неинвазивными). После выделения во внешнюю среду и контакта с воздухом и влагой в течение 1-5 дней происходит спорулирование ооцист, при этом каждая из них содержит две спороцисты с четырьмя спорозоитами, которые являются инвазионной формой.

Полное завершение энтероэпителиального цикла возможно в течение 3-10 дней после проглатывания тканевых цист.

Развитие клинической формы токсоплазмоза определяется особенностями взаимодействий паразит-хозяин, штаммом токосплазм, наличием иммуносупрессии и локализацией поражений ткани. При инвазиях, вызванных проглатыванием тканевых цист или ооцист, первые клинические признаки связаны с вызываемым тахизоитами некрозом ткани кишечника и ассоциированной лимфоидной ткани. Также возможно распространение T. gondii с кровью в иные органы помимо кишечника (печень, легкие, скелетные мышцы, глаза) с последующим развитием очаговых некротических поражений. Клинический исход заболевания определяется выраженностью поражений органов, прежде всего сердца, легких, печени и надпочечников. Хотя острые диссеминированные инфекции могут быть причиной летального исхода, чаще всего животное-хозяин выживает. У кошек не происходит активации классического пути комплемента при контакте с T. gondii, что является уникальной особенностью окончательного хозяина. Примерно через три недели после инвазирования тахизоиты исчезают из внутренних органов и локализуются в тканевых цистах (в форме брадизоитов). Данная фаза заболевания связана с системным иммунным ответом, который обеспечивает подавление паразитемии. Тканевые цисты могут сохраняться в организме хозяина на протяжении всей жизни. При разрушении тканевых цист высвобождающиеся брадизоиты могут вызывать рецидивирование болезни в период иммуносупрессии, например, при проведении химиотерапии или терапии глюкокортикоидами.

Причина, по которой в тех или иных случаях происходит развитие клинического токсоплазмоза, до конца не ясна. При этом играют роль такие факторы как возраст, пол, вид животного-хозяина, а также стадия паразита, попадающего в организм. Обычно при постнатальном заражении токсоплазмозом заболевание протекает в менее выраженной форме, нежели при заражении в пренатальный переиод. Стресс может способствовать активации инфекции T. gondii. Наличие сопутствующих заболеваний или иммуносупрессия могут способствовать повышению восприимчивости хозяина к инфекции T. gondii, которая представляет собой оппортунистический патоген.

Диагностика токсоплазмоза требует корректной интерпретации результатов клинических, цитологических, паразитологических, серологических и исследования методом ПЦР.

Существующие тест-системы ПЦР позволяют обнаруживать ДНК T. gondii в фекалиях больных животных и дифференцировать токсоплазм от других патогенов. ДНК T. gondii также может быть обнаружена в образцах крови здоровых собак и кошек, поэтому ПЦР обычно используется совместно с цитологическими, гистопатологическими или серологическими исследованиями. Наиболее точный диагноз при токсоплазмозе, сопровождающимся поражением ЦНС, может быть поставлен при обнаружении в сыворотке, цельной крови, асцитной жидкости или ЦСЖ специфичных антител к T. gondii, и получении положительных результатов исследования данных образцов методом ПЦР.

Исследуемый аналит: эпителий слизистой оболочки прямой кишки.

Подготовка пациента: не рекомендуется взятие соскобов после применения средств, облегчающих ведение термометра ; не рекомендуется взятие соскоба, если животное получает сорбенты.

Показания: рвота, диарея или запор.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: соскоб эпителиальных клеток со слизистой оболочки прямой кишки.

1. Урогенитальный зонд аккуратно ввести на глубину 0.5 см в прямую кишку и вращательными движениями набрать клеточный материал со слизистой оболочки.
2. Перенести зонд в микропробирку 2 мл с транспортной средой, вращательными движениями "смахнуть" биоматериал в жидкость, зонд утилизировать.
3. Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка.
4. Микропробирку маркировать Ф.И.О. владельца, кличкой животного, указать локализацию.
5. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.
6. Температурный режим транспортировки в лабораторию +2℃…+8℃ (синий пакет)

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Toxoplasma gondii

Литература: 

1. Craig E. Greene, DVM, MS, DACVIM, Infectious dieseases of the dog and cat, fourth edition ;

2. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф. Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.