Вирус иммунодефицита кошек (Feline immunodeficiency virus, FIV) (ПЦР)

ДНК содержащий вирус иммунодефицита кошек (Feline immunodeficiency virus, FIV) один из представителей семейства Retroviridae имеет высокую степень генетического родства с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) и поражает миллионы домашних и диких кошек во всем мире.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Передача вируса осуществляется парентерально через слюну или кровь больного животного, что обуславливает более широкую распространенность инфекции среди самцов. Экспериментально вирус передается при внутривенных, подкожных, внутримышечных, внутрибрюшинных инъекциях. Трансплацентарное заражение котят естественным путем - крайне редкое явление.

Патогенез инфекции FIV зависит от множества факторов, основными из которых являются возраст животного, инфекционные свойства вируса, количество патогена и путь заражения.

В момент заражения FIV происходит интеграция ДНК-копии вируса РНК (называемая провирусом) в геном кошки, что приводит к пожизненному инфицированию. В период первичной инфекции, который может длиться от 7 до тридцати дней) у зараженной кошки отмечают вялость и периферическую лимфоаденопатию. Бессимптомная инфекция, в период которой репликации вируса, практически, не происходит, протекает без клинических проявлений и может длиться на протяжении ряда лет. Фаза вторичной инфекции, вызванная репликацией вируса, протекает с клинической картиной, преимущественно, как результат лимфоцитопении.

Зараженные животные высоко восприимчивы к другим вирусным, бактериальным, грибковым и другим паразитарным инфекциям. FIV провоцирует развитие лимфосарком, лейкемий, фибросарком и пр.

Вирус FIV детектируется с использованием полимеразной цепной реакции в плазме или лимфоцитах периферической крови спустя две недели или ранее после заражения в пик виремии. В этот период поражаются одноядерные клетки красного костного мозга, мозга, легких, почек и желудочно-кишечного тракта. Продуцирование антител против вируса зависит от концентрации вируса в организме кошки, чем выше концентрация, тем эффективнее начинается выработка более чем 70 видов антител. У экспериментально зараженных животных это состояние отмечали спустя четыре недели с момента заражения. Латентный период инфекции характеризуется продолжением репликации вируса в тканях, с возможностью восстановления из сыворотки и плазмы крови, клеток лимфоидной ткани, спинномозговой жидкости. Вирусная нагрузка на организм кошки может варьировать в процессе жизни. По мнению клиницистов, проявления заболевания многообразны, а симптомы не патогномоничны.

Тестирование кошек на FIV рекомендуется в следующих случаях:

• все больные кошки, даже если результаты предыдущих анализов были отрицательны;
• все вновь приобретаемые кошки с неизвестным статусом FIV;
• все кошки, которые имели контакты с зараженными животными или подозреваются в заражении вирусом. Таким животным требуется контрольное обследование спустя 2-3 месяца для выявления сероконверсии;
• кошки с неконтролируемым образом жизни вне помещения;
• кошки, проживающие с зараженными животными;
• кошки перед вакцинацией;
• животные доноры и принимающие участие в вязках.

Подтверждение диагноза возможно при обнаружении специфических антител против FIV с использованием ELISA. Вестерн-блоттинг и непрямой иммунофлуоресцентный метод имеют в случае с FIV низкую специфичность, особенно у вакцинированных кошек. В целом, в случае выявления антител важно учитывать тот факт, что у котят до шестимесячного возраста в крови могут присутствовать антитела, полученные от инфицированных или вакцинированных матерей. Также важно, что, в среднем, выработка антител у зараженных животных начинается спустя минимум 60 дней после контакта с вирусом, выработка антител может не происходить при интенсивном прогрессировании заболевания. Ложноотрицательные результаты можно получить у зараженных животных с ослабленным иммунитетом.

В настоящее время ПЦР один из наиболее чувствительных и применяемых методов диагностики вируса. К отрицательным характеристикам этого метода следует отнести его зависимость от высокой вариабельности вирусного генома, тогда как разработанные диагностические наборы сконструированы на основе генетических последовательностей хорошо изученных и широко распространённых генетических типов вируса. Это, в свою очередь, может привести к ложноотрицательным результатам в диагностике.

Исследуемый аналит: костный мозг.

Подготовка пациента: небольшой дискомфорт, который может возникнуть при данной манипуляции, рекомендуется устранять путем введения препаратов для местной анестезии, сильнодействующих препаратов или с помощью общей анестезии легкой степени.

Перед проведением аспирации шерстный покров сбривают, кожу обрабатывают антисептическим раствором.

Показания:

• стоматит и/или хронические или рецидивирующие инфекции кожи, мочевого пузыря и верхних отделов дыхательных путей;
• наличие у кошки медленнной, но прогрессирующей потери веса или выраженного истощения;
• перед возвращением кошки домой из питомника;
• перед помещением кошки в питомник, где содержится много животных этого вида;
• после возможного инфицирования кошки (тест проводится через более 2 месяца после возможного инфицирования);
• если кошка содержится с ВИК-инфицированными кошками;
• наличие факторов высокого риска (например, некастрированный кот после драки с сородичами);
• как один из тестов, проводимых для проверки состояния здоровья.

Противопоказания: непереносимость препаратов для местного обезболивания и противопоказания к общей анестезии, согласно протоколу оценки степеней риска.

Метод отбора биоматериала: аспирация костного мозга.

1. Провести процедуру взятия костного мозга (КМ).
2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).
3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.
6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента. 
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Формат выдачи результата: качественный метод. Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе провирусной ДНК Feline immunodeficiency virus, FIV.

Использованная литература:

1. Westman ME, Malik R, Norris JM. Diagnosing feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukaemia virus (FeLV) infection: an update for clinicians. Aust Vet J. 2019 Mar;97(3):47-55. doi: 10.1111/avj.12781. Review.
2. Little S, Bienzle D, Carioto L, Chisholm H, O'Brien E, Scherk M. Feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus in Canada: recommendations for testing and management.
   Can Vet J. 2011 Aug;52(8):849-55. Review.