Хламидиоз (Chl. felis) (ПЦР)

Хламидии – облигатные внутриклеточные бактерии рода Chlamydiales, которые вызывают главным образом конъюнктивит у кошек, но также могут играть роль в развитии системных и репродуктивных патологий у собак и кошек, которые до настоящего времени недостаточно хорошо изучены.

Хламидии существуют в двух формах: элементарное инфекционное тельце, имеющее диаметр от 0,2 до 0,6 мкм, которое существует вне клетки, и ретикулярное тельце, имеющее больший размер (от 0,5 до 1,5 мкм), которое не является инфекционным и способно делиться в цитоплазме клеток хозяина до достижения зрелости – образования элементарного инфекционного тельца. Элементарные тельца способны выживать во внешней среде при комнатной температуре в течение всего нескольких дней и быстро инактивируются большинством дезинфектантов. Передача инфекции в основном происходит при прямом контакте, иногда воздушно-капельным путем, возможно инфицирование котят матерью после рождения. Контаминированные предметы играют важную роль в передаче инфекции при групповом содержании кошек.

Хламидии локализуются в эпителиальных клетках зрительной, дыхательной, пищеварительной и мочеполовой систем; сообщалось об инфекциях с поражением синовии. У одних видов хламидий имеется тенденция к видоспецифичности, другие виды могут вызывать инфекции у различных видов животных. Наиболее значимым патогеном у кошек по всему миру является Chlamydophila felis, вызывающая острый и хронический конъюнктивит. Инфекция чаще всего наблюдается в условиях группового содержания кошек, особенно в питомниках. ДНК C. felis редко обнаруживается в мазках с конъюнктивы от клинически здоровых кошек. Имеются данные, согласно которым хламидии обнаруживаются у 30% кошек с конъюнктивитом. Инфекция C. felis чаще встречается у молодых кошек, главным образом, в возрасте от 2 до 12 месяцев. Защита от инфекции котят до двух месяцев обеспечивается материнскими антителами, хотя сообщалось о случаях неонатальных инфекций. У кошек старше 5 лет развитие инфекции C. felis очень маловероятно. Часто наблюдаются коинфекции с другими респираторными патогенами, такими как герпесвирус кошек 1 (FHV-1) и калицивирус кошек (FCV). Неизвестно, возможна ли передача инфекции половым путем, как в случае с другими видами хламидий, однако у некоторых из инфицированных кошек микроорганизмы обнаруживаются в выделениях из влагалища. Также отмечаются выделения из прямой кишки и глаз.

После попадания элементарных инфекционных телец в организм животного они превращаются в ретикулярные тельца, которые размножаются с помощью простого деления с образованием включений, которые не подвергаются слиянию с лизосомами. Затем ретикулярные тельца вновь превращаются в элементарные тельца, которые высвобождаются во внеклеточное пространство после лизиса клетки и инфицируют другие клетки хозяина. Полный цикл репликации продолжается около двух дней.

Хламидии поражают главным образом эпителиальные клетки, однако могут инфицировать клетки эндотелия, гладкой мышечной ткани, лимфоциты, моноциты и макрофаги. C. felis размножается в цитоплазме эпителиальных клеток конъюнктивы, после чего с кровотоком микроорганизм проникает в миндалины, легкие, печень, селезенку, органы желудочно-кишечного тракта и почки. Через 2-5 дней после инфицирования обычно наблюдается острый, хронический или рецидивирующий конъюнктивит, при этом регистрируются симптомы ринита, такие как выделения из носа и чихание. Клиническое состояние большинства кошек остается удовлетворительным, аппетит сохраняется. Симптомы поражения нижних отделов респираторного тракта, такие как кашель и диспноэ, наблюдаются в редких случаях, так же как кератит и изъязвление роговицы. Последние обычно вызываются коинфекцией таких патогенов, как FHV-1. После периода острого конъюнктивита инфекция может персистировать в течение многих месяцев, сопровождаясь слабо выраженным конъюнктивитом, либо симптомы болезни могут отсутствовать.

В одном исследовании хламидии были выделены из конъюнктивы через 215 дней после экспериментального инфицирования. Остается неясным, является ли хроническая форма заболевания результатом реинфицирования либо персистирования хламидий в организме. Коинфекции другими патогенами, такими как FCV, FHV-1, Bordetella и Mycoplasma могут способствовать повышению тяжести заболевания и продолжительности периода выделения микроорганизма во внешнюю среду. Остается неясным, может ли инфекция C. felis вызывать поражение репродуктивной системы у кошек. В этом могут играть роль такие факторы, как срок беременности, наличие коинфекции, например, FHV-1, наличие иммуносупрессии, путь передачи инфекции, штамм микроорганизма.

Исследуемый аналит: аспират, полученный в результате бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ).

Показания: взятие образца у животных во время бронхоскопии, а также для диагностики в тех случаях, когда у животного наблюдается кашель, затрудненное дыхание, выявляются патологические изменения в легких при рентгенографическом исследовании или другие признаки заболевания респираторного тракта;

при необходимости получения образцов у животных с признаками таких респираторных заболеваний, при которых результат других, менее инвазивных процедур (соскоб эпителиальных клеток из носовой полости), оказался не информативен.

Противопоказания:

• отсутствие в клинике условий для обеспечения животного дополнительным кислородом в течение нескольких часов после проведения БАЛ;
• исследование противопоказано тем животным, у которых наблюдается затруднение дыхания даже на фоне назначения им кислородотерапии;
• любые противопоказания для проведения общей анестезии.

Подготовка пациента:

• утром перед исследованием животное не кормить. Так как процедура бронхо-альвеолярного лаважа проводится под общей седацией, пациента необходимо подготовить, в соответствии с соблюдением всех требований, в зависимости от группы анестезиологического риска.
• Биоматериал отбирается до применения местных и системных лекарственных препаратов.
• Техника взятия должна проводиться с соблюдением правил асептики/антисептики для минимизирования возможной контаминации из верхних дыхательных путей.

Метод отбора: Бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ) – это метод получения образца жидкости с диагностической целью из мелких дыхательных путей – альвеол и в некоторых случаях из интерстициальных тканей. Лаваж (смыв) обычно выполняют во время бронхоскопии, что позволяет провести визуальный осмотр дыхательных путей и осуществить прицельный смыв с определенных долей легких. Кроме того, БАЛ можно выполнять и без бронхоскопа. Стерильный физиологический раствор вводят в легкие в достаточном объеме, чтобы он заполнил альвеолы. Затем раствор вместе с клетками и жидкостью с эпителиальной выстилки легких аспирируют обратно.

Преаналитика:

1. Провести процедуру взятия бронхоальвеолярного лаважа.
2. Перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА).
3. После внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом.
4. Заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С.
5. Пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию.
6. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.   
7. Температурный режим транспортировки в лабораторию -17℃…-23℃ (красный пакет)

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ БАЛ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ  

Интерпретация: Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Необходимо иметь в виду, что после начала антибиотикотерапии в течение нескольких дней результаты ПЦР обычно остаются положительными.

Формат выдачи результата: качественный тест

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК Chlamydia  felis

Использованные источники:

1. Ш.Ваден, Д.Нолл, Ф.Смит, Л.Тиллей. Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям собак и кошек.

2. Infectious  Dieseases of  the dog and cat, fourth edition ISBN: 978-1-4160-6130-4 Copyright © 2012, 2006, 1998, 1990 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.

3. Sykes JE. Feline chlamydiosis. Clin Tech Small Anim Pract. 2005 May;20(2):129-34. Review.