Изготовление препарата до стекла с окрашиванием, без консультации патолога из операционного материала (до 6 блоков)
Гистологическая кассета – одноразовая пластиковая прямоугольная емкость размером 4см х 2,7см х 0,6см с защелкивающейся крышкой, с отверстиями в корпусе и крышке, в которую на этапе вырезки помещают фрагмент биоматериала толщиной не более 0,4см. Она предназначена для гистологической проводки (фиксация, обезвоживание, уплотнение) и заливки образцов в парафин (изготовление блоков). Размер парафинового блока будет таким же, как и кассета или меньше. Тест AN508 предусматривает, что присланный биоматериал разложат только в 2 таких кассеты, а AN518 предусматривает 6 кассет.
Ткани и органы для гистологического изучения подвергаются предварительной сложной обработке, имеющей целью сделать объект пригодным для микроскопического исследования.
Основными этапами такой подготовки являются: фиксирование, обезвоживание и уплотнение (всё вместе называют «проводкой» биоматериала), заливка, изготовление срезов, окрашивание и заключение срезов. Для приготовления постоянного препарата необходимо перевести живую протоплазму гистоструктур в неизменное состояние для предотвращения её распада и гниения. Обычно для фиксации используется формалин в 10%-ном растворе. Для хорошей фиксации берут небольшой фрагмент биоматериала ~ 2,5см х 3см х 2см. Объём фиксирующей жидкости должен в 20-30 раз превышать объём фиксируемых образцов ткани. Фиксация обычно продолжается около суток и может длиться более продолжительное время в зависимости от характеристики структуры ткани. Быстрой фиксации способствует, главным образом, небольшая толщина фрагмента. Мелкие кусочки (эндобиоптаты и пункционные биопсии) фиксируются значительно быстрее и дают возможность изготовить препарат в более ранние сроки. После фиксации материал становится несколько плотнее, но ещё недостаточно для изготовления тонких срезов. Для обезвоживания и уплотнения образец ткани последовательно переносят в спирты восходящей концентрации, оставляя в каждом, от нескольких часов до суток. Исключение составляет жировая ткань, для которой необходимо более продолжительное время проводки – до трех суток В последнюю очередь биоматериал помещают в диализатор со 100 градусным спиртом. После обезвоживания плотность фрагмента увеличивается, но для получения тонких срезов его необходимо залить в парафин. Парафиновая заливка требует значительно меньше времени, чем любая другая и с ней получают более тонкие срезы. Парафиновые срезы, наклеенные на стёкла, удобно дальше обрабатывать и хранить, а парафиновые блоки могут храниться долгое время.
Для изготовления срезов используется специальный прибор - микротом системы Майнота для парафиновых блоков с неподвижным ножом. Парафиновые срезы сразу наклеиваются на предметные стёкла с полизиновым покрытием. Окраску срезов проводят специфически окрашивающими веществами. В качестве основного красителя (синяя краска) чаще всего используют гематоксилин, который окрашивает хроматин клеточных ядер, а из кислых красителей (красная краска) – эозин, окрашивающий всю протоплазму клетки. Обычно сначала срезы красят основным красителем, промывают, а затем окрашивают кислым красителем. Заключение срезов – последний этап изготовления постоянного гистологического препарата. В качестве среды для заключения применяются прозрачные застывающие среды, которые пропитывают срез, затвердевают, прижимая покровное стекло к предметному, и удерживают срез.
Сроки исполнения: 7 дней (плюс 1-2 дня для регионов).
Исследуемый аналит: биоптаты тканей и органов.
Показания: гистологическое исследование особенно ценно при изучении новообразований – оно позволяет определить их характер (доброкачественный или злокачественный), стадии процесса, скорость роста, результативность терапии. Также гистологические исследования широко используются в гастроэнтерологии, оториноларингологии, трансплантологии, дерматологии и других разделах ветеринарной медицины.
Противопоказания: общие противопоказания для седации (в случае невозможности проведения процедуры без ее применения). Ограничениями для проведения гистологического исследования могут стать нарушения свертываемости крови и аллергия на анестетики (эти факторы не позволят провести биопсию), тромбоцитопения, сердечная недостаточность.
Метод отбора: провести процедуру биопсии.
Преаналитика: биоптат поместить в контейнер (гистопот), заполненный соответствующим объемом забуференного 10% раствора формалина. Соотношение биоматериал: формалин должно быть не менее 1:10. Подписать контейнер – вид, кличка животного, фамилия владельца. Заполнить все графы направительного бланка с ОБЕИХ сторон! Температурный режим транспортировки в лабораторию +2℃...+8℃ (синий пакет). Не замораживать!
Форма выдачи результата: бланк с макроописанием присланного биоптата, готовые гистологические препараты – парафиновые блоки, стекла с окрашенными срезами.
