Хламидиоз (Chlamydia spp.) (ПЦР)

Хламидии — облигатные внутриклеточные бактерии рода Chlamydiales, которые вызывают главным образом конъюнктивит у кошек, но также могут играть роль в развитии системных и репродуктивных патологий у собак и кошек, которые до настоящего времени недостаточно хорошо изучены. Хламидии существуют в двух формах: элементарное инфекционное тельце, имеющее диаметр от 0,2 до 0,6 мкм, которое существует вне клетки, и ретикулярное тельце, имеющее больший размер (от 0,5 до 1,5 мкм), которое не является инфекционным и способно делиться в цитоплазме клеток хозяина до достижения зрелости — образования элементарного инфекционного тельца. Элементарные тельца способны выживать во внешней среде при комнатной температуре в течение всего нескольких дней и быстро инактивируются большинством дезинфектантов. Передача инфекции главным образом в основном происходит при прямом контакте, иногда воздушно-капельным путем, возможно инфицирование котят матерью после рождения. Контаминированные предметы играют важную роль в передаче инфекции при групповом содержании кошек.

Хламидии локализуются в эпителиальных клетках зрительной, дыхательной, пищеварительной и мочеполовой систем; сообщалось об инфекциях с поражением синовии. У одних видов хламидий имеется тенденция к видоспецифичности, другие виды могут вызывать инфекции у различных видов животных.

Наиболее значимым патогеном у кошек по всему миру является Chlamydophila felis, вызывающая острый и хронический конъюнктивит. Инфекция чаще всего наблюдается в условиях группового содержания кошек, особенно в питомниках. ДНК C. felis редко обнаруживается в мазках с конъюнктивы от клинически здоровых кошек. Имеются данные, согласно которым хламидии обнаруживаются у 30% кошек с конъюнктивитом. Инфекция C. felis чаще встречается у молодых кошек, главным образом, в возрасте от 2 до 12 месяцев. Защита от инфекции котят до двух месяцев обеспечивается материнскими антителами, хотя сообщалось о случаях неонатальных инфекций. У кошек старше 5 лет развитие инфекции C. felis очень маловероятно. Часто наблюдаются коинфекции с другими респираторными патогенами, такими как герпесвирус кошек 1 (FHV-1) и калицивирус кошек (FCV).

Неизвестно, возможна ли передача инфекции половым путем, как в случае с другими видами хламидий, однако у некоторых из инфицированных кошек микроорганизмы обнаруживаются в выделениях из влагалища. Также отмечаются выделения из прямой кишки и глаз.

После попадания элементарных инфекционных телец в организм животного они превращаются в ретикулярные тельца, которые размножаются с помощью простого деления с образованием включений, которые не подвергаются слиянию с лизосомами. Затем ретикулярные тельца вновь превращаются в элементарные тельца, которые высвобождаются во внеклеточное пространство после лизиса клетки и инфицируют другие клетки хозяина. Полный цикл репликации продолжается около двух дней.

Хламидии поражают главным образом эпителиальные клетки, однако могут инфицировать клетки эндотелия, гладкой мышечной ткани, лимфоциты, моноциты и макрофаги. C. felis размножается в цитоплазме эпителиальных клеток конъюнктивы, после чего с кровотоком микроорганизм проникает в миндалины, легкие, печень, селезенку, органы желудочно-кишечного тракта и почки. Через 2–5 дней после инфицирования обычно наблюдается острый, хронический или рецидивирующий конъюнктивит, при этом регистрируются симптомы ринита, такие как выделения из носа и чихание. Клиническое состояние большинства кошек остается удовлетворительным, аппетит сохраняется. Симптомы поражения нижних отделов респираторного тракта, такие как кашель и диспноэ, наблюдаются в редких случаях, так же как кератит и изъязвление роговицы. Последние обычно вызываются коинфекцией таких патогенов, как FHV-1.

После периода острого конъюнктивита инфекция может персистировать в течение многих месяцев, сопровождаясь слабо выраженным конъюнктивитом, либо симптомы болезни могут отсутствовать.

В одном исследовании хламидии были выделены из конъюнктивы через 215 дней после экспериментального инфицирования. Остается неясным, является ли хроническая форма заболевания результатом реинфицирования либо персистирования хламидий в организме. Коинфекции другими патогенами, такими как FCV, FHV-1, Bordetella и Mycoplasma могут способствовать повышению тяжести заболевания и продолжительности периода выделения микроорганизма во внешнюю среду.

Остается неясным, может ли инфекция C. felis вызывать поражение репродуктивной системы у кошек. В этом могут играть роль такие факторы, как срок беременности, наличие коинфекции, например, FHV-1, наличие иммуносупрессии, путь передачи инфекции, штамм микроорганизма.

Инфекции хламидий редко встречаются у собак. Сообщалось об инфекции Chlamydia psittaci у собак с респираторными заболеваниями, сопровождавшимися пневмонией и плевральным выпотом, а также кератоконъюнктивитом. В одном исследовании у группы сук с выделениями из глаз и признаками поражения нижних отделов дыхательных путей были случаи рождения мертвых щенков снижения размера помета. По результатам исследования мазков с конъюнктивы и глотки методом ПЦР была обнаружена C. psittaci.

Внедрение метода ПЦР в диагностике инфекций хламидий у животных было революционным прорывом ввиду его быстроты, чувствительности и специфичности. Дополнительным преимуществом является тот факт, что образцы для исследования не требуют специальных условий при транспортировке.

Существуют тест-системы ПЦР, как стандартные, так и в реальном времени, в которых в качестве образца для исследования обычно используются мазки с конъюнктивы.

Необходимо иметь в виду, что после начала антибиотикотерапии в течение нескольких дней результаты ПЦР обычно остаются положительными. Использование растворов для местного применения, таких как проксиметакаин и флюоресцеин, не оказывает влияния на результаты исследования методом ПЦР в реальном времени на наличие инфекции C. felis, однако наблюдается незначительный ингибирующий эффект при использовании фузидовой кислоты. Ввиду того, что у некоторых кошек при отсутствии конъюнктивита возможно получение положительных результатов ПЦР на C. felis, интерпретация данных должна осуществляться с учетом данных анамнеза, наблюдаемой клинической картины и реакции на проводимое лечение.

Преаналитика:

1. провести процедуру взятия бронхоальвеолярного лаважа;
2. перенести полученную жидкость в пробирку с сиреневой крышкой (ЭДТА);
3. после внесения жидкости, осторожно перевернуть пробирку 6-7 раз для перемешивания материала с антикоагулянтом;
4. заморозить в вертикальном положении при -17°С…-23°С;
5. пробирку маркировать Ф.И.О. владельца и кличкой животного, указать локализацию;
6. заполнить направительный бланк, указав код клиента;
7. cохранность образца при  -17°С…-23°С 2 недели.

МИНИМАЛЬНЫЙ ОБЪЕМ БАЛ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 МЛ

Интерпретация:

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Результат исследования:

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе ДНК С. felis.